MTS法探讨联合应用组蛋白去已酰化酶抑制剂和顺铂对口腔鳞癌细胞的毒性作用.pdfVIP

MTS法探讨联合应用组蛋白去已酰化酶抑制剂与顺 铂对口腔鳞癌细胞的毒性作用1 申俊，周红梅，陈谦明 四川大学华西口腔医学院口腔粘膜病学研究室，四川成都（610041 ） E-mail ：ianchen63@ 摘 要：目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA( Suberoylanilide Hydroxamic Acid)与顺铂 联合应用对口腔鳞癌细胞Tca8113及KB的毒性作用。方法 采用MTS法首先检测不同浓度的 SAHA和顺铂单独作用于口腔鳞癌细胞后，对其生长增殖的影响。然后，根据细胞对两种药 物的剂量反应，选择低剂量的SAHA和顺铂进行联合应用，以MTS法进一步观察联合两种药 物的使用对口腔鳞癌细胞的毒性作用。结果 口腔鳞癌细胞Tca8113和KB对两种药物，即 SAHA和顺铂都较敏感；低剂量的SAHA和顺铂联合应用较之两种药物的单独使用，能显著 提高药物对口腔鳞癌细胞的生长抑制作用（P0.05 ）；在联合用药方式上，先后或者同时给 予两种药物都能显著提高药物的杀细胞功效，两种方式相比无显著差异性（P0.05 ）。结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA与顺铂的联合应用具有明显的协同效应，两种药物的联合使 用有望成为口腔磷癌治疗领域的新策略。 关键词：组蛋白去乙酰化酶化酶抑制剂，顺铂，口腔鳞状细胞癌，细胞毒性 表观遗传学及相应的表观基因治疗是目前肿瘤防治研究的一个新兴领域，核心研究内容 涉及DNA 的甲基化及组蛋白的乙酰化修饰[1,2] 。其中，以组蛋白的已酰化状态为靶标的药物， 即组蛋白去已酰化酶抑制剂(Histone deacetylase inhibitors，HDACS)是最有前景的一类新药。 在一系列的体内外实验中该类药物都表现出了较好的抗瘤活性，同时还与一些传统的化疗药 物具有良好的协同作用[3,4] 。目前，关于该类药物在口腔肿瘤领域的研究报道甚少，鉴于此， 本实验首次尝试在口腔鳞癌的治疗研究中将其与顺铂相结合，通过细胞毒性研究，初步探讨 其联合传统化疗药物应用于口腔鳞癌治疗的可能性，同时也为进一步的实验提供依据。 1. 材料和方法 1.1 材料 DMEM培养基，胎牛血清（Fetal bovine serum, FBS ）购自Gibco公司，SAHA购自Alexis 公司，用DMSO配置成10mM储存液，-20℃保存。顺铂购自辽宁锦泰药业公司,用生理盐水 配置成1mg/ml储存液，-4 ℃保存。MTS试剂购自Sigma公司。 1.2 细胞株 口腔鳞癌细胞株Tca8113购自四川大学卫生部移值工程和移植免疫重点实验室，口腔鳞 癌细胞株KB 由四川大学华西口腔医院黏膜病学教研室提供。 1.3 药物处理 首先，检测单独使用不同浓度的SAHA或顺铂对口腔鳞癌的两种细胞的细胞毒性作用。 分别以不同浓度的SAHA （0.5、1、2、4、8、10µM）及顺铂（2、4、6、8、10µg/ml）处理 Tca8113及KB细胞，作用24小时后，换用含10%FBS的DMEM培养基继续培养24小时，进行 细胞毒性检测。其后，根据细胞对单独使用这两种药物的剂量反应，选择将低剂量的两种药 1 本课题得到国家自然科学基金( 、教育部新世纪人才支持计划 (NCET-04-0865)和教育部博士点基金(20040610077)的资助。 -1- 物进行联合应用，SAHA （2µM ）与顺铂（4µg/ml ）先后或同时处理细胞4小时后，换用含 10%FBS的DMEM培养基继续培养24小时，进行细胞毒性检测。 1.4 细胞毒性检测（MTS法） 收集生长良好的Tca8113及KB细胞，制成单细胞悬液后调节细胞密度，以5×103/孔接种 于96孔板，待其融合度达到60%左右加入不同浓度的药物，每组每浓度设立三个平行孔，调 节每孔液体量为100µl。药物处理结束后，每孔加入MTS20µl ，37℃5%CO2孵育1小时，测 490nm