RNA干扰技术的研究新进展.pdfVIP

914 重庆 医学 2011年3月第4O卷第9期 · 综 述 · RNA干扰技术研究新进展 赵震宇 综述，张 铀△审校 (昆明医学院第二附属 医院血液科 ，昆明 650101) 关键词 ：RNA干扰 ；临床应用 ；新进展 doi：10．3969／j．issn2011．09．035 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671—8348(2011)09—0914—03 RNA干扰 (RNAinterference，RNAi)是由双链 RNA介导 个碱基对的序列，在基 因组数据库 中进行 BLAsTIM 分析 ，这 的序列特异 的基 因沉默现象，它在转录水平 、转录后水平和翻 种方法普遍适用于动物细胞 ，设计 的 siRNA中有 6O ～7O 译水平上阻断基 因的表达 ，具有高效性和高特异性的特点。小 可 以发挥沉默效应 ，但沉默效应率差异较大，针对一个靶基 因 干扰 RNA(smallinterferingRNA 或 shortinterferingRNA， 需要设计 3～4条siRNA，以保证能够筛选 出一条有效序列 j。 siRNA)是 RNAi作用中的效应分子 ，作为引导序列 ，按照碱基 3．2 siRNA的合成方法 互补原则识别靶基 因转录 出的信使 RNA(mRNA)，并引导沉 3．2．1 化学合成法 此法所获产物非常纯 ，siRNA干扰成功 默复合物(RNA—inducedsilencingcomplex，RISC)复合体结合 率高，但价格 昂贵限制了其应用和推广。 mRNA。随后 siRNA与 mRNA在复合体中换位 ，核酸酶 Dic～ 3．2．2 体外转录法 分别合成互补 的两条带有某启动子 的 er将 mRNA切割成 21～23核苷酸 (nucleotide，nt)的片段 ，从 DNA范本 ，各 自在体外转录形成两条单链 ，将两条单链退火后 而可以破坏特定 目的基因转录产生 的mRNA，使其功能沉默 。 形成双链 RNA。 现就 RNAi作用 的机制、RNAi的特点 以及 RNAi在临床应用 3．2．3 酶消化法 抑制率高，但此法产生的混合物可能导致 的新进展作一综述 。 非特异性抑制 ，另外在体外转录长链 RNA有困难 ，Dicer酶费 1 研究背景 用较高 一。 DNA 的遗传信息决定生命 的主要性状 ，而 mRNA在信息 4 RNAi技 术的特点 传递中起着很重要 的作用 。其他两大类 RNA，rRNA和 tRNA RNAi广泛存在于植物 、真菌 、线虫 、昆虫 、大 鼠、小 鼠、猴 同样在 蛋白质 的生物合成 中发挥不可 替代 的重要功能 。因此 以及人等几乎所有 的真核生物细胞 中 j，其共 同特点为 ：(1) mRNA、rRNA、tRNA在遗传信息 由DNA传递到表现生命性 RNAi是转录后水平的基因沉默机制 ；(2)RNAi具有高度特异 状的蛋白质的过程 中起着举足轻重的作用。 性，dsRNA只降解与之序列相应 的单个 内源性 mRNA；(3) 2 RNAi技术 RNAi抑制基 因表达具有高效性 ；(4)RNAi抑制基 因表达具有 RNAi是指细胞 中导人与 内源性 mRNA编码 区某段序列 遗传性 ；(5)发生 RNAi的dsRNA长度为 21～23个核苷酸长 同源 的双 链 RNA (double—strandedRNA，dsRNA)，可 致 该 度 比较稳定 ，较长的 dsRNA必须 由Dicer酶切割成相应长度 mRNA发生特异性降解从而导致基 因表达沉默的现象口。目 的siRNA后才可发生作用 ；(6)RNAi具有 ATP依赖性 。 前，对于RNAi的发生机制普遍认为是：外源性 (如病毒)或 内 5 RNAi