肠毒清颗粒对肝硬化内毒素血症大鼠模型内毒素及炎症因子的干预研究.pdfVIP

造模组在腹腔注射大肠杆菌内毒素前 12小时，随机分组分为模型组、乳果糖治疗组、 肠毒清高、低剂量组，每组各 13只。乳果糖组：给予 60%乳果糖5ml/kg体重容量灌胃； 肠毒清高剂量组：给予肠毒清5ml/20g/kg体重容量灌胃；肠毒清低剂量组：给予肠毒 清 5ml/10g/kg体重容量灌胃。正常组与模型组：均给予生理盐水 5ml/kg体重容量灌 胃；各组均每天 1次进行灌胃，连续 10天。实验结束后处死全部大鼠，获取样本。 所有动物采血前禁食不禁水 12小时，在水合氯醛麻醉、无菌无热原条件下，腹主动脉采血、 剖腹取肝脏，取肝脏组织制备肝匀浆。制备肝脏组织学标本。 用采血针从腹主动脉采血约 10ml，取 5ml加入无热源的真空采血管，置于冰水中，迅速 低温离心 10min(1000r/min)，取离心后血浆于-70℃低温保存待测内毒素。 1.4观察指标及其方法 1.4.1内毒素的测定（鲎试剂法）鲎试剂盒：厦门市鲎试剂实验厂有限公司，编号：080415-C。 严格按照说明进行操作。 1.4.2-6测定IL 按北京普尔伟业生物科技有限公司IL-6放射免疫分析盒说明书操作。编号：080501 1.4.3-a测定TNF 按北京普尔伟业生物科技有限公司TNF-a放射免疫分析盒说明书操作。编号：080502 1.4.4 NO测定一氧化氮（NO）硝酸还原酶法试剂盒：南京建成生物工程研究所。编号：080430 1.5统计学处理： 采用SPSS13．0统计软件对数据进行处理，资料数据以均数±标准差(x ±s)表示，先确定样 本是否符合正态分布，再行方差齐性检验。若方差齐，各组间比较采用单因素方差分析，若 方差不齐，各组间比较采用独立样本的t检验。不符合正态分布的用非参数检验，取a=0．05 作为显著性检验标准。 2.结果 2.1大鼠一般状况 正常组无死亡；肝硬化动物模型，内毒素血症模型的制备过程中，模型 组死亡5只；实验分组中乳果糖组死亡3例，肠毒清高剂量组死亡2例，低剂量组死亡 2例，模型组死亡 3例。 2.2大体观察 正常组大鼠腹腔未见明显异常。部分肝硬化模型组大鼠脾脏增大、腹水形成。对照组肝 脏大体观察为暗红色，形态、体积正常，模型组肝脏为灰白色，部分体积缩小，质地硬，表 而呈小结节或小颗粒状改变。 2.3组织学观察 正常组大鼠肝小叶结构完整，肝索排列整齐，汇管区无纤维化，肝细胞形态正常( 见图 1)。肝硬化模型组 （图2）大鼠正常肝小叶结构被破坏，汇管区纤维组织增生，可见炎 细胞浸润，病变严重的原来的肝小叶被分割包绕成大小不等的圆形的肝细胞团，即假小叶， 小叶中央静脉缺如、偏位或出现两个以上的中央静脉，假小叶内肝细胞索排列紊乱，出现脂 肪 变 性 、 气 泡 样 变 ， 细 胞 体 积 增 大 ， 核 大 ， 着 色 深 。 图 2 图 1 图3 图4 图5 肠毒清低剂量组 （图 3）肝组织结构紊乱，较多芒状纤维和纤维间隔形成，纤维间隔内见少 量单核、淋巴细胞浸润，偶见肝细胞脂肪变性，灶性肝窦内kuppfer 细胞肿胀。 肠毒清高剂量组 （图4 ）肝组织结构尚可，1 汇管区周围见芒状纤维和少量单核、淋巴细胞 浸润，偶见肝细胞脂肪变性。 乳果糖组 （图5）肝组织结构紊乱，大量纤维间隔和假小叶形成，可见结节内中央静脉缺如 和偏位。 2．4肠毒清颗粒对大鼠血浆内毒素及大鼠肝匀浆TNF-a、IL-6、NO含量的影响(x ±s) _______________________________________________ 组别 动物数(n) 内毒素 (EU/ml) -a(ng/ml)TNF IL-6(ng/ml)NO(umol/L) ＊ 正常组 10 0.18±0.03＊ 0.16±0.11＊ 48.19±9.75 23.46±8.66 模型组 10 ±0.060.78 0.75±0.46 ±9.87101.0091.19±11.33 乳果糖组 10 0.32±0.04＊△ 0.38±0.14＊△ 71.59±12.88＊△ 37.39±14.61＊ 肠毒清低剂量组 11 0.33±0.06＊△ 0.27±0.1