何首乌提取物对APP转基因拟痴呆小鼠ERK蛋白表达及磷酸化影响.pdfVIP

现代化中药制剂发展与中药药理学研究交流会 何首乌提取物对APP转基因拟痴呆小鼠ERK蛋白 表达及磷酸化的影响 张兰L2，邢颖’，叶翠飞‘，李林卜，董奇2．． 1．首都医科大学宣武医院药物研究室，教育部神经变性病学重点实验室，北京 100053 2．北京师范大学认知神经科学与学习研究所，北京100875 disease，AD)的作用， 摘要：目的：为探讨细胞信号转导异常在阿尔茨海默病(Alzheimer’S 以及中药何首乌有效成分二苯乙烯营(TSG)防治AD的药理机制，观察不同时程APP转基因拟痴 呆小鼠脑内ERK蛋白的表达和磷酸化改变，以及药物的干预作用。方法：拟AD动物模型为4到 16月龄APP695V7171转基因小鼠。4月龄起灌胃给予TSG6个月。另一批未处理的APP转基因小 鼠饲养至lO月龄开始灌胃给予TSG6个月。同背景同月龄C57BL／6J小鼠为正常对照组。细胞外信 号调节激酶1／2(ERKI／2)蛋白的表达和磷酸化改变检测应用western blotting。结果：早期4月龄 蛋白表达的增高。总的EIⅨ1／2蛋白表达在4、10、16月龄对照组、APP转基冈模型组和各给药组 小鼠脑内，均无明显变化。结论：ERKI／2作为MAPK信号转导通路的重要成分，其蛋白表达在不同 鼠脑内明显改变，将影响信号转导功能，并进一步导致脑内功能障碍及病理损伤。TSG可调节 p-ERKI／2至正常水平，对维持正常的细胞信号转导功能、防治AD等神经退行性疾病具有良好的应 _Hj前景。 关键词：阿尔茨海默病，APP转基因小鼠，细胞外信号调节激酶1／2(ERKI／2)，二苯乙烯苷 。 张兰，女，1972．7，北京人，首都医科大学宣武医院药物研究室，博士，副研究员；北京师范大学认知神 经科学与学习研究所博士后，研究方向：神经生物学(神经药理专业)。 。通讯作者，李林，女，1953．4，首都医科大学宣武医院药物研究室主任，博十生导师，研究员：Tel： 63 肌醇酯一Pl(C途径等。MAPKs信号转导通路作为体内最重要的信号转导通路，可能在AD发病中的作 转导调节的中心位置，对于维持细胞存活起重要作用12I。APP转基因小鼠模型出现明显的学习记忆障 老年斑形成，是国际公认的AD动物模型I引。目前国内外应用APP转基因小鼠模型进行ERK蛋白表达 及磷酸化改变的研究更鲜有报道。 240 现代化中药制剂发展与中药药理学研究交流会 泛应用提供了进一步的实验依据。2,3,5,4’．四羟基二苯乙烯．2郇D．葡萄糖甙( 效成分，在多种拟痴呆动物和细胞模型上也表现出良好的神经保护作用‘”l。本实验应用国际公认的 APP转基因AD动物模型观察了中药有效成分二苯乙烯营的药理机制。 1材料和方法 1．I药物 multiflomm Thunb的干燥块茎)的主要 乙烯菅，简称TSG)是何首鸟(蓼科植物何首乌Polygonum 水溶性成分和主要有效成分‘蝴。本实验用药由宣武医院药物研究室提取，纯度72％，批县020423。实验 采用干粉剂餐，溶丁．蒸馏水制成药液13,¨I。 一 1．2仪器与试药 件(TINAVersion2．08e)。 实验中所朋一抗，其特性、使用浓度、产晶号及生产公司详见表l。 表1．本实验使用的抗体 二抗、ECL试剂盒购自SantaCruz公司、硝酸纤维素膜购l兰lGloucestemr公司。 1．3方法： 13．1 APP转基囡小鼠模攀的建立和分组给势500l 小鼠，雌雄各半(作为正常对照)，购自中国医学科学院实验动物研究中心。予首都医科大学实验动 SPSS统计软件产生随机数字随机分为模犁组， 以蒸馏水灌胃。正常对照组、模型和给药组灌胃至lO月龄时进行行为学检测，然后处死。剩余的 小鼠设为正常对照组。对照组和模型组给以蒸馏水灌胃。对照组、模型和给药组灌胃至