结核分枝杆菌特异性抗原ESAT6de串联表达及其免疫原性研究.pdfVIP

·48· 中华临床医师杂志(电子版 015年 3月第9卷第 6期 ChinJClinicians(ElectronicEdition)．Mmeh15．2015．v0I_9．No．6 临床 论 著 结核分枝杆菌特异性抗原 ESAT6的串联 表达及其免疫原性研究 刘晓磊 张慧丽 李峰。 王战争 韩静 杨艳坤 高岭 。 【摘要】 目的 表达并纯化ESAT6c2融合蛋白，并对融合蛋白免疫原性进行鉴定，以用作结 核菌特异性IFN-TElispot试剂盒的特异性抗原。方法 全基因合成ESAT6目的基因，利用BamHI 和B II同尾酶串联 目的基因，构建ESAT6e2．pET25b重组质粒，转化E．eoli，诱导表达。Ni柱亲和 纯化融合蛋白，测定浓度后应用到T．SPOT-TB试剂盒 (Oxford)检测临床样本进行免疫原性研究。 结果 成功构建了ESAT6串联表达重组质粒，制备出高纯度的ESAT6e2融合蛋白。临床样本检测 结果表明ESAT6c2融合蛋白作为刺激源，与临床诊断相比特异性为 100％(202／0)，灵敏度为84．61％ (33／39)；与 T．SPOT-TB试剂盒 TA检测孔有较强一致性 (Kappa=0．932)。稳定性研究也表明， ESAT6e2融合蛋白经加速破坏试验后，与临床诊断相比特异性为 100％ (20／20)，灵敏度为 84．38％ (27／32)：依然与TA检测孔有较强一致性 (Kappa=0．923)。结论 获得的高纯度 ESAT6c2融合蛋 白，可以应用于结核菌特异性 IFN-yElispot试剂盒。 【关键词】 ESAT6； 原核表达； 免疫原性 Tandem expressionofthespecificantigenESAT6ofMycobaeterium tuberculosisandthestudyon immunogenicity ofthefusion protein LiuXiaolei，ZhangHuilie,LiFeng~ WangZhanzhengIHan , ， Jing ， 悟 Yankun4 , Gao工咖 ．ZhengzhouBiocellBiotechnologyCo．，Ltd．，Zhengzhou45001~China, ZDepartmentofEndocrinology,ZhengzhouNo．7People HospitalZhengzhou45000~China；Clinical Laboratory,ZhengzhouNo．6People Hospital,Zhengzhou450000,China；CollegeofLyleScience, ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001，China Correspondingauthor．GaoLing,Email：gaolingbest@126．com [Abstract] Objective ToexpresstheESAT6c2fusionproteinandnaalysishteimmunogenicity ofhtefusionproteni．M ethods SynhtesizedthegeneofESAT6andconstructedtheESAT6c2-pET25b plasmidwim hteisocaudamertechnique．Expressedhteufsionproteni ni E．colinadpurifiedbyaffinity chromatography．TheufsionproteinwasusedinhteT．SPOT-TB Kittodetectclniicalsamplesni order toevaluatehteimmunogenicity．Results 111erecombinnatplasmidESAT6c2-pET25bwassuccessfully constructed，andhteufsionproteniESAT6c2wasefficientlypurified，furthermore，theu