蜂王浆对雄性SD大鼠和ICR小鼠脑、肝、肾及外周血DNA甲基化影响.pdfVIP

华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 369 蜂王浆对雄性SD大鼠和ICR小鼠脑，肝，肾及外周血 DNA甲基化的影响 周明1，刘莉2罗勇兵1，谢国秀1，刘志勇11 1．江西省职业病防治研究院毒理室(省医学实验动物中心)2．江西省医学会 [摘要]目的本试验以蜂王浆作为受试物，探讨其对SD大鼠和ICR小鼠的生理生化指标及基因组甲 效液相色谱检测DNA甲基化水平。结果试验结果各剂量组与对照组比较无显著差异。结论口服蜂 王浆对雄性大、小鼠脑、肝、肾及血液DNA甲基化水平没有影响。 [关键词]蜂王浆；SD大鼠；ICR小鼠；DNA甲基化水平 蜂王浆在蜂群中起着十分重要的作用，蜂王终生以蜂王浆为食物，因此蜂王的生殖器官发育完全， 并具备超常的生殖能力，且自然寿命通常可达5年以上，是蜂群中最大的个体。工蜂同样是由受精卵发育 而来，是蜂群中的雌性蜂，但由于工蜂在幼虫时期就开始停止食用蜂王浆而转为食用工蜂浆和蜂粮，致使 工蜂的生殖器官发育不完全，并且寿命、型体上更是远不如蜂王¨。。 给基因完全相同的雌性蜜蜂幼虫饲喂不同的饲料，可以分化出决大多数的工蜂和少数几个的蜂王。哺 育蜂给部分幼虫饲喂充足的蜂王：浆，而给其他幼虫饲喂较少的蜂王浆，食充足蜂王浆的幼虫可以发育成蜂 王。尽管工蜂和蜂王在DNA水平上一致，但是它们的形态、生理特征、生殖能力、寿命以及行为习性却有 惊人的差异圆。 营养因素特别是有生物活性的食物成分和甲基化关系密切。流行病学研究表明，饮食中低叶酸摄入也 可能合并有酒精摄入增加导致DNA整体低甲基化，改变基因表达，从而增加大多数癌症的发生率‘31；而缺 乏维生素B12将直接影响叶酸进入细胞和各种生化反应；营养素中的硒、钙等微量元素对DNA甲基化酶具 有抑制作用，故硒、钙缺乏会导致DNA甲基化酶活性增加，与结肠癌的发生有关H1；同样有研究显示，用 过量的视黄酸(维生素A的活性代谢产物)治疗也可使小鼠肝基因低甲基化崎。。 鼠、ICR小鼠为研究对象，实验：犬、小鼠各32只(杏)，分成4组，为蜂胶高，中，低剂量组和空白对照组， 连续四周喂食蜂王浆。4周后隔夜禁食取少量抗凝血液和部分脑、肝、肾组织，用DNA提取试剂盒提取其 中的DNA，高效液相色谱分析其DNA甲基化水平。61，了解其对大、小鼠的基因组甲基化水平影响。 [基金项目】江西省卫生厅科技项目，项目号 [作者简介]周Fill(1968．．)，男，助理研究员，主要从事毒理学研究 [通讯作者】刘志勇(1969．)男，研究员，主要从事毒理学研究E-raaih 370 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 1材料与方法 1．1实验动物与饲养管理 饮水经121℃高压灭菌30min，动物自由取食饲料和饮水。 1．2受试物及配制 新鲜蜂王浆(江西农业大学蜜蜂研究所)，储存于一18。C，每天新鲜配制。 1．3试剂与仪器设备 Gencrmic DNA 的分析纯高氯酸(南通朗源化工有限公司)，分析纯磷酸二氢钾(北京中西远大科技有限公司)。 2—16K高速冷冻离心机(SIGMA)，Fine-doX3凝胶成像系统(天能科技上海有限公司)，DK一8型电 热恒温水浴锅(上海东星建材试验设备有限公司) ，DYY-6C型电泳仪(北京市六一仪器厂)高效液相色 谱仪(HPLC 1200series)。 AgilentTechnologies 1．4试验方案设计 本试验分为四个组，每组各8只大、小鼠，采用灌胃的方式，连续四周喂食蜂王浆。试验A组至C组 小鼠按0．2ml／109，试验D组为对照组，灌胃等量普通饮用水。 1．5基因组DNA甲基化水平的检测 1．5．1基因组DNA的提取及检测 u 取-80。C冷冻的脑、肝、肾及血液，组织用lOOmg，血液用150l，用DNA提取试剂盒按操作步骤逐 一提取其中的DNA，1％琼脂糖凝胶电泳检测其是否含有DNA及DNA的提取质量川。 1．5．2样品的前处理