视神经星形胶质细胞原代培养技术的研究.pdfVIP

228 ACTAACADEMIAEMEDICINAESUZHOU2001；21(2) · 方法与技术 · 视神经星形胶质细胞原代培养技术研究 卜曙阳 黄 经 周丽英 孙立军 孙志方 (苏州大学附属第二医院，苏州215004) 摘要：目的 介绍一种快速原代培养、分离、纯化视神经星形腔质细胞的方法。方法 对 期小鼠的视神经进行 组织块原代培养，振荡法分离纯化，形态学观察，免疫组织化学染色。结果 培养的星形细胞纯度高，GFAP染色 显示98％阳性。结论 组织块原代培养，振荡法分离纯化视神经的星形胶质细胞，对细胞的损伤小、纯度高．是快 速得到该细胞的理想途径。 关 键 词：视神经；培养；细胞；小鼠 中围分娄号：Q343．6 文献标识码：A 文章编号：1000—5749(2001)02—0228—03 ConditionedPrimaryCultureofAstrocyteinRatOpticNerve BUShu—yang．HUANG Qiang，ZHOULi—ying．etal {TheSecondHospitalAffiliatedtoSuzhouUniversity，Suzhou215004，China Abstract：0bjective Tointroduceamethodforconditionprimaryeultureofastrocyteofoptic nerve．Methods CondhlonedmediHillWaSmadeofGGF—BF ．andastrocyteofopticnervewascul— turedandpurifiedbyshaking．Identificationwasmadebymealisofmicrosocpeobservationandim— munohlstochemiatry．Results Astrocyteofratopticnervewascukurde and pur ifide ，which showed positivereactiontoglialfibrillaryaeid／cprotein(GFAP)．c帅c】岫jnⅡ Conditionedprimarycuhureof rat opticnerve，purifiedthroughshaking．isareliableandquickmethod Keywords：opticnerve；culture；cell；rat 视神经胶质细胞包括星形胶质细胞和少突胶质 (GGF—BF．GIBCO)20~g／ml组成。 细胞两种类型，起源、分化不同，功能各异。近年来 12 视神经胶质细胞的来源、培养 Balb／c新生小 国外一些研究表 明；1一型星形胶质细胞能促进 O一 鼠由本院脑肿瘤研究室提供．产后 2天(P2)，雌雄不 2A祖细胞向2一型星形胶质细胞和少突胶质细胞 限，75％酒精浸泡 2rain后立即移进超净台，在 4× · 分化．而且未成熟星形胶质细胞能促进损伤后的视 1O额带式显微镜下开眶取出眶内段的视神经，置于 神经再生。本实验采用小 鼠眶内段的视神经进行条 无菌培养皿 中，剔除血管，0．01otol／LPBS洗涤 3 件化原代培养，振荡法分离、纯化．纯化细胞进行形 遍，用显微组织剪剪至小块状．加入培养基，接种于 态学观察、免疫组化鉴定．为进一步研究星形胶质细 塑料培养瓶中，置37℃、5％co2培养箱中培养。 胞的功能奠定基础LIq]。 13 分离、纯化 培养 4天后第 1次换液．7天后 扩瓶，置 37℃、5％c 培养箱 24h后吸出培养液 ， 1 材料与方法