中度嗜盐菌群对多环芳烃降解机理初步探讨.pdfVIP

专题四：污染环境生物修复与环境保护工程 过程以及降解菌株分子遗传机制，丰富降解酶及其他相关基因的信息，为实际应用于生物修复P：AHs的 污染具有极为重要的意义。 本课题组从胜利油田盐碱土中富集到10％盐度下能够降解菲的中度嗜盐菌。在0．1％．20％盐度下，菌 群中稳定存在着两种萘双加氧酶基因，分别属于A似砌”D麟础lfzg一“泐眦刀砌g册P和枷以铆f西耐 艘，砌，艘Mg硎P。盐度变化改变菌群微生物群落结构，但是却没有改变功能基因的多样性。 PAHs的降解始于羟基化双加氧酶对苯环的羟基化，将菲在3、4位处羟基化形成顺一3’4一二氢二羟基 菲，因此羟基化双加氧酶系统是整个降解过程中的关键酶，限速酶。这是一个由三种功能不同的蛋白组 分构成的电子传递体系，包括铁氧还蛋白还原酶、铁氧还蛋白和末端氧化酶．分别由p口柚J、p口M?和 阳M鲥4编码。其中末端氧化酶一般包括n亚基和D亚基，a亚基与双加氧酶的催化功能密切相关，包 结构，可能与底物特异性有关。其中，编码末端氧化酶(即剐eske型铁硫蛋白)的基因高度保守。 本文利用∞亚基的某些保守序列设计简并引物，对嗜盐菌群中的样品进行PCR扩增得到两条长度 氧还蛋白和末端氧化酶，础，和朋艋与绿脓杆菌中的卵|jI基因相似度最高，分别为84％和87％．实验 中发现，在p口彪的下游扩增出雕解部分序列，p口矗口编码顺一萘双氢二醇脱氢酶基因，催化顺一3，4_二氢 二羟基菲形成3’4一双羟基菲：在阳M2上游克隆了一段未知基因，也有研究发现，在朋M』和p口枷?之 间存在未知功能基因，缺失该序列后不影响双加氧酶的功能，可能是水杨酸羟化酶的电子传递链的组分。 总之，从嗜盐菌群中克隆出萘羟基化双加氧酶基因的序列与已报道的双加氧酶基因在进化上相距较 远。因此，研究高盐环境下多环芳烃降解机制并阐述其酶系结构和功能的进化关系，将有助于认识细菌 适应高盐环境的分子机制，为高盐环境下混合菌群降解P：AHs的应用并最终通过基因重组构建P：AHs高 效降解菌株奠定理论基础。 中度嗜盐菌群对多环芳烃的降解机理的初步探讨 何芬王瑟 清华大学环境学院微生物所 摘要：地球上存在许多盐和高盐生态系统，其盐浓度从3．5％(w～)到饱和浓度35％不等。P：AHs 广泛存在于石油、石油类产品、石油冶炼及其化学工业的废水中，由于事故、泄露和排放等人类活动， 每年有数亿加仑石油及其工业废水(盐度3．5％w／v)污染江口、海滩、含盐的油田开采区和石油冶炼区等 地。多环芳烃(P娜s)是一类具有潜在致畸性、致癌性和遗传毒性的重要环境污染物，对人类健康和生 态环境造成很大的危害。环境中高盐度导致P=AHs在高盐度环境中比普通环境中存在时间更长，此外， 普通微生物对含盐环境中眦ls的去除效果不太理想。很多研究证明嗜盐微生物能够在含盐环境中栖息 繁殖，并且对污染物的降解能力往往超出人们的预期。所以，嗜盐微生物的环境修复机理与技术具有重 要的理论研究价值和广阔的应用前景。 高盐环境中PAHs的生物降解过程更为复杂，而且与普通环境中PAHs的生物降解机制可能有很大 2ll 专题四污染环境生物修复与环境保护工程 的不同。目前，有关真正属于中度嗜盐菌范畴，且能降解PAHs的微生物及微生物菌群的研究报道非常 少，也基本没有研究中度嗜盐菌群降解即山s过程和相关分子机制的文献报道。本文富集了一个中度嗜 盐菌群，以菲为模式多环芳烃，通过解析该菌群在不同盐度和不同菲浓度下的生长曲线、降解曲线、溶 解菲的曲线以及初始开环基因萘双加氧酶基因的表达曲线，对其降解机理进行初步探讨。 本文采用实时定量PCR(11eal．tin地PCR)检测基因拷贝数，同时以16S rRNA为内参基因进行归一 种不同盐度水平10％和20％条件下作了5组降解实验。在所有条件下，在迟滞期菌群几乎没有生长和降 解菲：进入对数期后，菌群稳定生长，对菲的降解呈一级动力学；在稳定期，菌群的数量不再增加，对 菲的降解不再显著。有固态菲存在(100mg／L，200mg，L)时，菌群的萘双加氧酶基因相对表达量在迟