猪卵巢发育组织学观察及磷酸二酯酶3A表达的研究.pdfVIP

华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 19 猪卵巢发育的组织学观察及磷酸二酯酶3A的表达研究 方天1’2，恽时锋1，石放雄2 (1．中I司人民解放军南京军区南京总医院比较医学科； 2．南京农业大学动物科技学院；南京210002) [摘要]目的为了研究母猪卵巢在不同发育阶段的组织学变化规律和探讨磷酸二酯酶3A(PDE3A)在 El龄、新生1日龄、生后20、120 卵巢发生发育和成熟过程中的生物学意义，方法选二花脸母猪胎90 mRNA的表达情况。结果胎 和180日龄的母猪卵巢若干，进行组织学观察，并利用RT．PCR检测PDE3A 90 El龄主要由原始卵泡组成；出生1El龄、20日龄、120日龄阶段发育明显，180日龄卵巢内观察到的 论二花脸母猪卵泡发育和成熟主要发生在生后120日龄以前。猪卵巢中有PDE3A基因的表达，且在猪 卵巢生长发育过程中PDE3AmRNA表达具有阶段特异性；说明PDE3A在卵巢发育及成熟过程中可能具有 调控作用。 [关键词]猪卵巢；磷酸二酯酶3A 卵泡发育是～个以形态变化为特征的生长过程，同时伴随着卵泡功能的分化[1】。原始卵泡一旦启动生 长，便是一个连续不断的发育和分化过程，要么变成优势卵泡，使卵子排放与成熟，要么中途闭锁。每个 性周期启动生长一组原始卵泡，同时生长启动的多数卵泡将不会达到排卵阶段，而是在发育过程中的不同 时期发生凋亡【lJ。卵泡发育过程的调节是一个复杂的过程，包括内分泌因素(促性腺激素1和卵巢内调节因 子(性激素、生长因子和细胞因子)，他们共同调控卵母细胞的生长发育【2J。 PDE3A是卵巢内表达的主要磷酸二酯酶亚型【3J，其在卵巢发育生长过程中能降解cAMP，使cAMP浓度 下降，从而下调FSH、LH浓度，达到维持细胞正常功能的作用。此外，PDE3A基因敲除小鼠排出的卵母细 明在小鼠卵母细胞中PDE3A通过调控cAMP水平影响PKA活性，从而对调节卵母细胞成熟起重要作用。 太湖猪以繁殖性能高和肉质鲜美等优良遗传特性而引起世界养猪界的高度关注。二花脸猪是太湖猪中 的优秀类群，它以母性好和高繁殖性能(平均产仔数16头)而著称于世，誉之为“世界猪种产仔之王”，是 研究太湖猪高繁殖性能的极佳的动物模型。 虽然有关猪卵巢不同发育阶段的组织学变化和PDE3A亚型在不同日龄的母猪卵巢组织中的表达已见 报道。但是关于二花脸猪卵巢不同发育阶段的组织学变化$口PDE3A亚型的表达，特别是在胎猪和新生时期 的表达至今未见报道。同时，本研究结果为阐述二花脸猪高繁殖力提高一定的理论依据，有助于提高畜群 的繁衍速度，增加畜牧业生产的效益。 1．材料和方法 90dayspostcoitum)为最后一次交配至母猪受孕第90天；出生1日龄(1dpp：1daypostpartum)为出生当天； 出生20曰龄则为出生后20天(20dpp：20dayspostpartum)。 20 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 1．2组织采样猪屠宰后迅速采集卵巢组织，一侧卵巢放于4％多聚甲醛中固定36．48h，以备进行组织学分 析；另一侧卵巢置于液氮中保存用于RT—PCR。 生兴)，2x DNA聚合酶混合物(南京博尔迪)，琼脂糖，DNA Taq 酒精，二甲苯等未特殊说明均来自国药。 1．4 min，自来水冲洗 HE染色每个卵巢取5张有代表性的石蜡切片脱蜡，梯度酒精水化，苏木素染色2 3rain，梯度酒精漂洗，伊红染色20s，脱水、透明、封片。Olympus,显微镜拍照。 1．5 RNA RT．PCR按试剂盒操作步骤提取mRNA。用TaKaRa 30S，60℃30S，72℃1 min，35个循环，最后72℃延伸10