猪瘟病毒NS2蛋白亚细胞定位及其对细胞增殖和周期调节作用.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集 猪瘟病毒NS2蛋白的亚细胞定位 及其对细胞增殖和周期的调节作用 唐青海1，一，张彦明P，范 丽1，仝 刚1，何 雷1，代 晨1 (1．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100； 2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001) 摘 要：为了探明猪瘟病毒(CSFV)NS2蛋白的亚细胞定位特征及其对宿主细胞增殖与周期的影响，本研究 采用RT．PCR方法扩增CSFVNS2基因，采用激光共聚焦技术研究了CSFVNS2蛋白的亚细胞定位特征；采用 MTS方法和流式细胞仪分析了细胞的增殖活性和细胞周期。结果表明：CSFVNS2蛋白质的分子质量约为53l【Il， A蛋白被蛋 该蛋白定位于细胞内质网上并诱导宿主细胞内质网应激反应，激活核转录因子NF．KB．促进Cyclin 白酶体所快速降解，进一步引起细胞周期阻滞于S期，最终抑制宿主细胞的增殖活性，但并不诱导细胞凋亡。本 研究首次探明了CSFVNS2蛋白的亚细胞定位特点及该蛋白调节细胞周期与增殖的分子机制，为揭示CSFV致病 的分子机制提供了科学依据。 关键词：猪瘟病毒；NS2蛋白；亚细胞定位；增殖周期 swine 猪瘟(Classicalfever，CSF)是由CSF病毒 reticulum， 定位于宿主细胞的内质网(Endoplasmic (csrv)弓l起的一种高度接触性传染病，被世界动物ER)上梆】。到目前为止，国内外还没有关于CSFV 卫生组织(OIE)列为必须上报的动物传染病之一【¨。NS2蛋白的亚细胞定位特征的报道。2007年， CSFV属于黄病毒科(Flaviviridae)的瘟病毒属(Pes— tivirus)，为有囊膜的单股正链线状RNA病毒，其基出来后对病毒的复制没有任何作用is]。然而，人们 因组5’端和3’端为非编码区(UTR)，中间为一个大对黄病毒科的其他成员的NS2蛋白功能的研究发 的开放阅读框(ORF)。编码区翻译约3898个氨基酸 现，该病毒不仅具有自身蛋白酶活性而且对宿主细 组成的多聚蛋白前体，经病毒蛋白酶和宿主蛋白酶 胞生理功能和病毒自身的复制均具有调节作用。最 作用后逐步降解为成熟的4种结构蛋白和8种非结 Cvirus， 典型的例子就是丙型肝炎病毒(Hepatitis 构蛋白，即c、E“、E1和E2为结构蛋白，妒、 HCV)编码的NS2蛋白，该蛋白定位于宿主细胞的 内质网上，也具有自身蛋白酶活性…们，而且能抑制 p7、NS2、NS3、Ns4A、Ns4B、NS5A及NS5B为 非结构蛋白㈣。 细胞的增殖，这一抑制作用可为病毒自身的复制增 近年来，对CSFV的非结构蛋白N即、NS3和殖提供更加优越的物质条件【ll】。 NS5B的功能研究较多，对非结构蛋白NS2的功能据此，我们推测CSFVNS2蛋白是否与HCV 了解甚少，普遍认为NS2仅具有自身蛋白酶活性在 NS2蛋白一样具有调控细胞周期与增殖的功能，如 NS2／NS3蛋白的自我酶解过程发挥作用13,5]。Lackner 果有调节作用，那么其中的机制是否相同?为此， 等人发现，CSFV 本研究克隆了CSFV NS2蛋白具有自身蛋白酶(Auto- NS2基因，并构建真核表达质 protease)活性，在宿