分子生物色谱在单味中药—当归、黄芪活性成分分析中的应用.pdfVIP

LC-064 分子生物色谱在单昧中药——当归、黄芪 活性成分分析中的应用 孔亮汪海林邹汉法张子忠倪坚毅 张玉奎 (中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分折中心大连 116011) 1前言 传统中药主要来源于天然的植物、动物资源，因此，中药具有成分复杂及质量易受产 地、气候、季节影响等特点。对于不同产地的中药，其相应活性成分的含量是有差别的。 进而带来了中药有效成分难以确定及定量标准、药品质量难以控制等不利因素”“。 对中药的活性成分进行定量分析的方法通常采用眦，Gc，TLc，毛细管电泳等， 由于成分复杂，这些方法对样品处理方面要求苛刻，需要对样品进行固相萃取或液．液萃 取等预处理，因而费时、费力、回收率低。人血清白蛋白(HsA)分子生物色谱在中药分析 中可排除大部分杂质干扰，针对活性成分定量分析，具有快速、有效、回收率高的特点。 HsA是血浆中最丰富的蛋白，药物与HSA的结合对药物及其代谢产物的运输、调节 活性及副作用具有重大影响。绝大部分的药物与HsA能定量地发生可逆性结合”。HsA 分子生物色谱正是将药物分子与血浆蛋白等生物大分子相互作用机理和色谱过程相结合， 使HsA作为色谱固定相成为快速准确她定量分析中药生理活性成分的新手段。本文利用 HsA分子生物色谱对当归水，甲醇提取液中的两种主要的活性成分阿魏酸、藁本内醑进行 了定量分析，并对4个产地的黄芪及兰州产红芪中活性成分的相对含量进行了比较。 2实验 2．1试剂与材料 乙腈为色谱纯(山东禹王实业总公司)；K2唧q，褂{2Pq均为分析纯(汕头市化学试 acid，Fa)购 剂厂)：纯水由MilIi．Q纯水系统(Millipore，usA)纯化制得：阿魏酸(Fenmc 备纯化而得；不同产地的黄芪样品由山东中医学院张子忠副教授提供。 ’ 2．2仪器 Lc．9A Uv 2．3单昧中药的提取 准确称取159经粉碎过筛(30目)的单味中药粉末置于烧瓶内，加入125mL的水，甲醇 浸泡lh，回流煮沸记时，定量分析时煮沸lh即可，将提取液经微孔滤膜(O．5um)过滤得 到进样溶液。 2．4色谱条件 。’ ’ 7．4)内 分子生物色谱：HsA色谱柱；分析当归的流动相50mmol，L磷酸钾缓冲液(pH 7．4)， 含有5％的乙腈，检测波长313nm；分析黄芪的流动相I．50mmo忱磷酸钾缓冲液(DH 一153． 74)内含有12．5％的乙腈，检测波长205nm，流速 11．50mmol，L磷酸钾缓冲液(pH 0．8mL，min，柱温35℃，进样量20uL。 3结果与讨论 Iuo 3．1用HSA柱分析市售当归中阿 魏酸与藁本内酯的含量 名“ 阿魏酸与藁本内酯是当归的两 8 ，． 个主要指标成分，定量分析时，阿 萝 魏酸与藁本内酯由于性质相差大， ‘4n 往往不能同时分析，但依据它们与 HsA都有相互作用的特点，用HsA 20 分子生物色谱可同时对二者进行定 o lo 20 30 mjn 量分析(如图I)，峰DI和D2分图1 当归的水／甲醇提取液在HsA柱上分离谱图 别为阿魏酸和藁本内酯。 本文采用外标法对市售当