气相色谱在α-亚麻酸分离分析中的应用.pdfVIP

GC一129 气相色谱在口．亚麻酸分离分析中的应用4 林华山 田逢雨侯镜德 (浙江大学分析测试中心杭州310027) 1前言 口一亚麻酸学名为全顺式’9，12，15．十八碳三烯酸，是动植物体正常生长所必需的o． 3系列的脂肪酸之一…。它本身不仅具有很重要的生理活性，而且它作为口．3系列的母体 之一，还可以在生物体内生成具有显著生理活性的EPA(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳 六烯酸)。综合目前的研究成果，口．亚麻酸的功能主要体现在；维持大脑和神经功能所必 需的因子，具有降血压、降血脂、抗血栓等作用，预防癌变和抑制肿瘤细胞转移的作用， 抑制变态性病变的作用。长期食用还可提高记忆力及智力，延长生命期”41。由于具有上 述重要的生理功能，口一亚麻酸在医药、食品、营养保健等方面都具有广+阔的应用前景， 但由于a一弧麻酸在天然生物体中的纯度较低，限制了它的运用。本文用乳化分离法、尿 包法及冷冻结晶．尿包法对混脂肪酸进行分离，以尿包法分离所得的口一亚麻酸样品用BF，． c，H，oc，心甲酯化后进行气相色谱分析，并以山嵛酸作内标对a．亚麻酸含量进行准确计 算，探索提纯a-亚麻酸的最佳分离方法。 2实验部分 2．1仪器和试剂 日本岛津Gc-7A气相色谱仪，浙江温岭分析仪器厂Gc一9790气相色谱仪，岛律G-RjB 数据处理机，甲醇、正己烷、氯化钠、尿素、10％BF3-C2H50C2也、十二烷基苯磺酸钠、 硫酸均为分析纯．水为去离子水．口-亚麻酸样品为浙大应化所提供。 2，2色谱条件 (i)毛细管柱分析条件 (2)填充柱分析条件 50mumin， Gc．7A气相色谱仪，20％DEG。柱(2mmi．d．×2m)，检测器：FID。载气：M 氢气流速：40mⅣmin’空气流速；50Ⅱl¨min。柱温：】70℃，汽化室温度：260℃。 23实验方法 (1)亚麻油样品的预处理 取亚麻油1009加入1209 50mL酸化lh左右，干燥得游离混脂肪酸。 冷却，静置分层，取上层黄色皂基加4：1H2s04 (2)甲酯衍生化反应”1 lO％BB—c2H，Oc2心溶液在70~80℃ 称取口一亚麻酸样品约100mg加5mL甲醇、6mL 水浴中加热回流10min，冷却后移入分液漏斗中，加3mL饱和食盐水后用3mL正己烷萃 +本文为浙江省自然科学基金297015资助项目 取，取上层清液作气相色谱分析。 (3)口-亚麻酸的分离 乳化分离法：称取一定量经皂化、酸化后制得的游离混脂肪酸加饱和Nacl溶液少量， 搅拌稍热后放入冰箱中冰冻。温度控制在一5℃～1I℃之间，冷冻5h，取出后加入同条件冷 冻过的O．1％的十二烷基苯磺酸钠乳化剂，搅拌均匀后加少量水稀释后高速离心分离，上 层黄色油加4：1H：sO．和水后用正己烷萃取，减压蒸去正己烷，甲酯化后进行气相色谱分 析。 尿包法：按m(混脂肪酸)：m(尿素)：m(甲醇)=l：3：7．92，称取尿素加于甲醇中，加热 至完全溶解，再加入混脂肪酸加热搅拌至澄清透明后，置于冰箱中在3~4℃下冷冻2．5h， 取出后减压抽滤分离液体和晶体尿包物并用少量甲醇洗涤晶体，加入4：1H2s04和水于液 相中用正己烷萃取两次，合并有机相，减压蒸去正己烷，甲酯化后进行气相色谱分析。 冷冻结晶一尿包法：取一定量混脂肪酸在冰箱中于o℃左右直接冷冻后。高速离心分 离，取上层油按与尿包法同样的比率进行尿包法处理，甲酯化后进行气相色谱分析。 3结果与讨论 3．1色谱柱的选择 口一亚麻酸样品的毛细管柱分离谱图如图1所示，a．亚麻酸样品的填充柱分离谱图如 图2所示。 从两图可以看出，30m的0V-10l毛细管柱不足以分离口．亚麻酸、亚油酸和油酸， 而采用2m的DEG。填充柱就可以收到较好的分离效果，这是因为口．亚麻酸、亚油酸、油 酸之间分子量的微小差别在非极性的oV-101柱上不足以得到分离，相比较，它们之间由 于双键数目的差别而引起的极性差别较大，在强极性的DEG。柱上得到较好的分离。 3．2口—亚麻酸的分离 将皂化、酸化后的混脂肪酸和经乳化分离法、尿包法