参元丹含药血清对缺氧%2f复氧心肌细胞自噬基因的Becline+1+mRNA影响.pdfVIP

参元丹含药血清对缺氧%2f复氧心肌细胞自噬基因的Becline+1+mRNA影响.pdf

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第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 白,鉴定出了很多冠心病血瘀证特异性血小板差异蛋白【63捌,根据中医“方证相应’’或“方 证相关”的原理,这些血小板差异蛋白极有可能是活血化瘀方药抗血小板治疗新的有效靶点 或靶点群,相信未来对此的深入研究会取得更多进展,为临床实际应用研发出疗效肯定、作 用靶点明确、作用机制清晰的具有抗血小板及抗栓作用的活血化瘀方药。 参元丹含药血清对缺氧/复氧心肌细胞自噬基因的 BeclIne1 mRNA影响 刘红旭1 解欣然2 吴宝1 李爱勇1 尚菊菊1 1.首都医科大学附属北京中医医院(北京,100010); 2.北京市中医研究所(北京,100010) 摘要 目的:从分子水平上观察参元丹含药血清对缺氧/复氧心肌细胞自噬的影响,进一步探讨 参元丹的心肌保护作用机制。方法:建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型。实验分组如下:1) 正常对照组:无血清培养液。2)模型组:缺氧2h,复氧2h。3)空白对照组:缺氧2h,复氧同 时分别加入5%、10%空白血清,作用4h。4)含药血清组:缺氧2h,复氧同时分别加入5%、10% 1 含药血清,作用4h;RT-PCR法测定Becline mRNA的表达。结果:镜下可见,与正常对照 l 组相比,模型组BeclinemRNA表达量增强,含药血清组与相应空白对照组比表达量降低, 但统计学差异不显著。结论:参元丹含药血清对缺氧/复氧心肌细胞自噬具有抑制作用,可 能是其保护心肌缺血再灌注损伤的机理之一。 心肌缺血再灌注存在自噬现象,自噬在缺血初期主要起保护作用,再灌注期则加重细胞 损伤导致死亡。本课题组己观察到益气养阴、破血逐瘀组方的参元丹能够抑制大鼠心肌缺血 再灌注损伤,有效降低心律失常发生率、减小心肌梗死面积,具有心肌保护作用。为进一步 探讨参元丹的心肌保护作用机制,进行了下面的实验研究。 114 第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 1.实验材料 1.1动物:Sprague 日龄,雌雄不限,由北京华阜康生物科技股份有限公司提供,许可证编号:SCXK(京) 2009.0007。 1.2药物与试剂 1.2.1受试药物 参元丹胶囊,批号:京药制字北京中医医院制剂室提供。 1.2.2试剂 Sigma,批号:HMBB6209;Penicilin Blue),solarbio,批号:T8070;小鼠抗a-Sarcomericactin单克隆抗体,武汉博士德 (Typan 生物工程有限公司;兔抗Fibronectin多克隆抗体,武汉博士德生物工程有限公司;SABC即 MTT),sigma公司。 1.3仪器 C02培养箱, 型高压蒸汽灭菌系统,SANYO,日本;CSl01.IFB型电热恒温鼓风干燥箱,重庆万达仪器 有限公司;3.18K低温高速离心机,Sigma,德国;IMT型倒置相差显微镜,OLYMPUS, 日本;全波长酶标仪,Thcrrno,美国。 2.实验方法与步骤 2.1含药血清的制备 将40只SD大鼠随机分为两组:含药血清组给予参元丹O.059/kg(根据临床等效剂量换 算而成,用蒸馏水配制成水溶液),空白血清组给予等量0.9%NaCI溶液,2次/d,连续5d, 无菌条件下分离血清。56C,30min灭活,.80。C保存备用。 2.2心肌细胞的原代培养 115 第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 取新生SD乳鼠,碘酒消毒胸腹部皮肤。无菌条件下剪开胸部皮肤,在乳鼠剑突下剪开 胸腔,取出心脏,迅速用冷的PBS液清洗三次,洗去心脏表面及血管中残留的血细胞,并 剪除大血管。将心脏移至消化瓶中,剪成约Imm3大小的组织块,加入5倍于组织体积的胰 蛋白酶和胶原酶II型的混合消化液(胰蛋白酶终浓度为0.04%;胶原酶II型终浓度为0.04%), 37。C分次消化,每次约lOmin,直至组织块消化完全。收集除第一次以外的消化后细胞悬

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