响应面法优化恩施富硒茶总RNA提取条件.pdfVIP

响应面法优化恩施富硒茶总RNA 的提取条件 李慧，崔清梅，梁金波，徐小江 （湖北省恩施州农科院,湖北恩施, 445000 ） 摘要：为了更好的研究和利用恩施地区富硒茶，得到高质量、高纯度的茶树总RNA ，以便从分子层面探讨茶树吸 收、聚集硒元素的原理，本实验从加样量、总RNA 沉淀时间、总RNA 放置时间三个影响总RNA 提取质量的因 素，运用响应面法优化了恩施富硒茶的总RNA 提取条件。 关键词：响应面；恩施；富硒茶；总RNA The Optimal Extraction Conditions of Enshi Se-enriched Tea RNA by Response Surface Methodology LIHui,CUIQingmei,LIANGJinbo,XUXiaojiang (EnShi Autonomous Prefecture Academy of Agricultural Sciences,EnShi,445000,China ） Abstract ：In order to study and make better use of Se-enriched tea in Enshi，get RNA of high quality and high purity, to investigate the principle of absorption, accumulation of selenium tea on the molecular level, this experiment using response surface methodology optimized the extraction conditions of RNA in Enshi tea response from Sample amount, sedimentation time, standing time these RNA extraction quality factors. Keywords ：response surface methodology, Enshi, Se-enriched tea, RNA 恩施是我国著名的产茶区之一,拥有全球唯一已探明的独立硒矿床，有“世界硒都”之称。其中恩施富硒 茶因其富含硒元素而驰名中外[1] 。研究证明，富硒茶中的硒不仅可显著的促进早春茶树的发育，提高成品 茶的品质，更能显著的提高茶叶氨基酸和维生素C 的含量，降低茶多酚的含量，有效地阻止茶汤氧化和褐 变，使茶叶不论是汤色还是滋味方面均有提高[2,3] 。但是目前除了关于富硒茶的研究除了硒在茶树中的形态 以及施硒肥提高茶树的含硒量方面进展较快以外，富硒茶在分子层面的研究，无论是研究的深度还是广度 都是不够的，这样是不利于进一步发掘和利用富硒茶资源。 [4] 由于富含多糖和多酚 ，一直以来，提取高质量的茶树总RNA较为困难，一直是茶树分子研究中的一 个难题。史成颖等[5] 曾尝试用异硫氰酸胍法及其它方法提取，实验结果表明，虽然从嫩叶中提取的茶树总 RNA可以用于RT-PCR 反应，但从茶树根中提取的总RNA完全不能满足后续的分子实验。为此，本实验运 用响应面法[6-8]优化恩施富硒茶总总RNA 的提取条件，为后续对恩施富硒茶进行分子研究提供高质量的总 RNA ，保证实验的顺利进行。                                                                基金项目：国家自然科学基金 作者简介：李慧（1985-），女，湖北武汉人，助理农艺师，硕士研究生，从事茶树分子标记辅助育种研究。 E-mail 。 1 1 材料与方法 1.1 植物材料和试剂