协同型多肽探针设计及人血清白蛋白亲和相互作用分析.pdfVIP

第十届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会  协同型多肽探针的设计及人血清白蛋白亲和相互作用分析 于洋、黄嫣嫣*、金钰龙、刘国诠、赵睿 中国科学院化学研究所，中科院活体分析化学重点实验室，北京，100190 zhaorui@iccas.ac.cn 多肽作为重要的生理活性物质，具有生物相容性好、穿透性强、性质稳定、作用快的特 点，在复杂生物样品的分离分析以及免疫分析等领域表现出广阔的应用前景。然而为进一步 优化多肽探针的结构，设计构建高亲和力和高选择性的多肽探针仍是一个亟需解决的科学问 题。 从协同作用的基本原理出发，将针对靶分子不同位点的小分子多肽组装于骨架结构，所 获得的新型多肽探针有望成为多位点协同配基，实现亲和力和选择性的双重突破。本研究以 人血清白蛋白（HSA ）为模型蛋白质，选择其表面 3 个亲水结构域为靶点，基于正义肽-反 义肽相互作用原理，进行单点识别的小分子多肽的设计，获得了 3 条直读反义六肽。通过 FMOC 固相合成法制备了反义肽，并利用反相高效液相色谱法对粗产品进行了分离纯化，获 得了纯度均大于 95%的反义肽，用于HSA 与反义肽的分子相互作用研究。以甲基丙烯酸环 氧丙酯（PGMA ）微球作为载体，合成了以HSA 为配基的高效亲和填料，构建了 HSA 高效 亲和色谱体系，以考察 HSA 与 3 条反义肽的特异性识别能力。与此同时，还利用 SPR 免标 记、实时、高灵敏度的特点，以 3 条反义肽为识别元件，构建了 HSA 传感芯片，考察多肽 -蛋白质的识别作用。传感信号表明，HSA 在 3 种多肽传感芯片上均呈现快结合、慢解离的 动力学行为。通过计算，3 条反义肽和 HSA 的亲和力均达到微摩尔水平，而HSA 在对照点 芯片上不吸附，显示出特异性的亲和识别能力。将进一步通过设计、优化连接骨架结构，以 3 条亲和反义肽为基本识别单元，构建多位点识别的协同型多肽探针，尝试用于复杂生物样 品中高丰度 HSA 的去除，为蛋白质组学研究、疾病标志物的发现以及示踪药物运输的研究 发展分离分析新方法。 图 1、反义肽RP-HPLC 分离 图2 、不同浓度的HSA 与 pep-1 、pep-2 、 图 pep-3 及空白相互作用的 SPR 曲线 参考文献： [1] J. Heal, G. Roberts, J. Raynes, A. Bhakoo, A. Miller, ChemBioChem, 2002, 3: 136-151. [2] Y. Huang, R. Zhao, Y. Fu, Q. Zhang, S. Xiong, L. Li, R. Zhou, G. Liu, Y. Chen, ChemBioChem, 2011, 12: 1209- 1215. [3] Y. Huang, F. Hu, R. Zhao, G. Zhang, H. Yang, D. Zhang, Chem. Eur. J., 2014, 20: 158-164. [4] 感谢国家自然科学基金和中科院化学所的资助。 294