新型猪细小病毒(PPV4)TaqMan荧光定量PCR检测方法建立与应用.pdfVIP

第四次猪病学术研讨会会议论文集 表2免疫抗体(gB)的检测结果 表3野毒抗体(gE)的检测结果 分组 样品数 70同龄 84日龄 105U龄 阳性数 阳性率％ 阳性数 阳性率％ 阳性数 阳性率％ 试验组 40 0 0 O 0 O 0 对照组 40 3 7．5 9 22．5 15 37．5 _二者差异 -3 —7．5 -9 -22．5 -15 -37．5 3小结和讨论 3．1对新生仔猪用伪狂犬基因缺损疫苗滴鼻免疫时大家的普遍担忧足母源抗体的干扰问题， 我们的检测结果显示并不会f}{现干扰现象。这可能与滴鼻免疫后疫苗毒仪在局部粘膜或神经系统增 殖，并不进入血液系统与抗体发生中和反应。所以母源抗体的滴度在滴鼻免疫后没有出现卜．降的现 象，其机理有待进一步的研究。 3．2从表2町见50}{龄仔猪肌肉注射伪狂犬基凶缺损苗后三周的免疫抗体转阳率仅达到70％左 右，说明其抗体的产生受到了母源抗体的干扰，这与50日龄仔猪的母源抗体阳性率仍达58％(23／40) 相符。 3．3在伪狂犬基冈缺损苗肌肉注射后二周的抗体检测结果显示对照组的平均阻断率显著高于 试验组，这与对照组已发生了野毒感染有关、其中包含了部分野毒抗体所致。 3．4试验结果证实，对新生仔猪用伪狂犬基因缺损疫苗进行滴鼻免疫可以有效地阻断伪狂犬 的野毒感染。因此在种猪群已感染伪狂犬野毒的猪场或首次爆发伪狂犬的猪场，对3fI龄内仔猪进 行伪狂犬基网缺损疫苗滴鼻免疫是阻断伪狂犬野毒在保育猪和育肥猪中传播的有效方法。建议把滴 鼻免疫作为猪场伪狂犬净化或减少伪狂犬对猪场的危害的常规免疫程序。 3．5我们选择伪狂犬野毒阳性母猪所产仔猪进行试验，而}L在同一窝仔猪中进行分组试验， 从而可以有效地避免外界因素对试验结果的影响，所以我们的试验结果是客观真实的。 参考文献(略) 方法的建立与应用 黄律1龙进学1’翟少伦1’2刘长龙1张荣1袁世山1’ (1．中国农业科学院上海兽医研究所传染病防治研究室上海20024l；2．新疆农业大学动物医学院乌鲁木齐 830052) 异性引物及TaqM她探针，以VP2克隆质粒为标准品，通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度，镁离子浓度以及 基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务专项资金项目(20lO-JB05)；十一五国家科技支撑项目 (2006BAD06A04) 作者简介：黄律(1985一)，男，江苏溧阳人，硕士研究生，从事分子病毒学研究 443 病毒病一猪其他病毒病 殖与呼吸综合征病毒，猪瘟病毒，猪圆环病毒2型、猪细环病毒和猪源牛病毒性腹泻病毒均为阴性；批内及批间变 异系数均低于2％。用建立的荧光定量PcR方法对30l份临床病料感染情况进行检测，结果首次在我国猪群中检测 到PPv4，阳性率为3．32％，而普通PcR检出率仅为2．66％，且两种方法的符合率为loo％。结果表明，建立的检测 方法为PPw的检疫，分子流行病学调查以及敏感细胞的筛选等提供了新的快速检测技术． 关键词猪细小病毒4型；TaqMan荧光PcR；检测 PPV于1967年由 猪细小病毒(PPV)一直是危害猪群繁殖性能的主要传染性疾病之一。 Cam嘶蛳首次在不孕、流产、死胎母猪中分离到，并证实了其病原作用：引起猪繁殖障碍，除怀 孕母猪外，其他类型的猪感染后均无明显的临床症状。猪细小病毒还常和呼吸与繁殖障碍综合征病 毒(PRRSV)、圆环病毒(PcV)、伪狂犬病毒(PRV)混合感染，造成猪的繁殖障碍，给养猪业带来 霞人的经济损失。目lj{『研究认为，除r普通的PPV外，临床上还在多种PP