大鼠血管内皮祖细胞培养和鉴定.pdfVIP

2010 5 8 5 # 563 # 1) 朱 江, 刘煜敏, 孔朝红, 道文欣 : 探索骨髓来源的血管内皮祖细胞的分离培养方法, 为缺血性疾病治疗找到新的移 细胞来源 采集SD 雄 性大鼠骨髓细胞, 用梯度密度离心法分离单核 个细胞, 种 于提前包埋了纤维连接蛋白的培养皿中培养, 将血管内皮生长因子 ( VEGF) 重组纤维细胞生长因子( bFGF) 和重组上皮生长因子( EGF) 作为诱导剂, 将72 h 后贴壁细胞( A 组) 和非贴壁细胞( B 组) 分别培养, 观察细胞形态的变化以及数量变化, 取 A 组在第14 天, 应用免疫组化和免疫荧光技术鉴定内皮祖细胞系列标志 A 组细胞经过体外诱导后大量扩增, 在28 d 时仍有强大扩增的活力, 呈铺路石样, 而B 组细胞短期内可以大量增殖, 呈长索样, 之 后逐渐变少; 在细胞迁移实验中, A 组细胞可以相互融合形成血管结构, 而B 组细胞之间则不能融合, 随着时间推移, 逐渐凋亡; A 组经过CD34 免疫荧光CD133FLK- 1 免疫组化鉴定呈阳性, 并能特异性吸附FIT C-UEA-和内吞 DIL-Ac-LDL 自体骨髓 细胞通过贴壁换液后可以分离培养出内皮祖细胞, 取贴壁细胞经过体外诱导后大量扩增, 并通过表面标记物鉴定可以确认为内皮祖 细胞, 而非贴壁细胞不能大量增殖, 故将贴壁分离方法来筛选内皮祖细胞, 此方法简易, 并能满足细胞移 的需要, 因而, 在移 治疗 脑缺血引起的内皮损伤应该有较好的临床应用前景 : 内皮祖细胞; 骨髓; 细胞培养 : R32 . 2 : A : 1672- 134 (2010) 05-0563-03 Isolation and Culture of Endothelial Progenitor Cells Derived from Bone Marrow in Rats ZhuJiang,Liu Yumin,Kong Zhaohong, et al / / Department of Neurology, Zhongnan H ospital, Wuhan University( Wuhan 430071) bstract:Objective T o explore the procedures of isolation and cultivation of endothelial progenit or cells( EPCs) derived from bone marrow in rats.Methods EPCs w ere isolated from male Sprague-Daw ley rat by Ficoll density gradient centrifugat ion. Discs were coated w ith fibronect in before EPCs w ere cult ured in M 1 in vit ro, w hich induced by vascular endothelial growt h factor( VEGF) , bas- ic fibroblast growth factor( bFGF) and epidermal growt h factor( EGF) . After 72 hours, adherent cells ( A group) and nonadherent cells + + + ( B group) w ere cultured respectively .T he morphous features of cells w ere studied. The