菲普拉宗和BSA与HSA的相互作用的研究.pdfVIP

第十届全国有机分析学术研讨会 菲普拉宗与BSA和HSA的相互作用研究 李来仲 贺吉香 李瑛 江崇球 (山东师范大学化学系．济南250014) 关键词 牛血清蛋白 人m清蛋自 菲普拉宗荧光光度法 摘要本文研究在人体生理PH条件下，菲普拉宗与人血清蛋白和牛血清蛋白的相互作用，求 出了菲普拉宗与BsA和HSA的形成常数，并根据热力学参数确定了它们之间主要作用力类型。 血清蛋白是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白，它内源性物质和外源性物质，“泛结 合，菲普拉宗为吡唑酮类消炎镇痛新药，本品口服后主要经肠道吸收进入血液后犬部分与 血浆蛋白结合。半衰期在人体约20pb时以上…本文研究了在人体生条件下菲普拉宗与人血 清蛋白的相互作用，并利用该药对血清蛋白荧光的猝灭求出了菲普拉宗与蛋白质的结合常 数与结合位置，并根据热力学参数确定了它们之间的主要作用力类型，这对于阐明不同蛋 白对药物的不同作用方式和药物在人体内的作用机制有一定意义。 1仪器和试剂 度计(上海雷磁仪器厂)。 X 菲普拉宗溶液：l 10叫mol／L的50％的乙醇溶液：牛血清蛋白溶液：称取适量牛血清 解； 缓冲溶液：0．1哟l／LPH_7．4的tris-HCl缓冲溶液。所有试剂均为分析纯，实验H{水 为二次压沸蒸馏水。 2实验方法 液均保持PH=7．4NaCl溶液浓度0．1mol／L(用以维持离子强度) 3结果与讨论 3．1 菲普拉宗与蛋白质的结合常数 当温度不同时，在浓度一定的蛋白质溶液中，分别加入不同浓度的菲普拉宗溶液，作 发射光谱。由于蛋自质中色氨酸和酪氨酸的存在，使其具有内源荧光。当固定BSA和HSA的 变)。说明菲普拉宗对BSA、IlsA的荧光有猝灭现象。 为进一步证明其猝灭过程，把此过程按动态过程处理，猝灭过程为 (1) FofF=I+Kq％[Q]=l+k。[Q] l(4：双分子猝灭过程速率常数，Ksv动态猝灭速率常数，％猝灭体不存在时荧光分子平 8。故可由 均寿命，[Q]：猝灭剂浓度，而K。=l(q％，I(q=l(I，／％由于生物大分子荧光寿命约为10 D127 第十届全国有机分析学术研讨会 猝灭曲线斜率求猝灭常数，见表l。 s) 表1 BSA．ttSA在不茼温度下的猝灭逮率常数(L．／moI 而各类猝灭剂对生物，大分子的最大扩散碰撞 温度(℃) K。(8SD K。OPSA) 猝灭常数为2．0：10”L／mc：l·S，显然菲普拉宗对 ——互jr一—i薪；币r——T：了了i对石『_一‘ 蛋白质荧光猝灭常数远远大于扩散控制的l(q，所 35 ：3．033(10。 f．399X10。 105 1．332X105 45 2．939X 以进一步证实此猝灭不是由动态碰撞引起的，而 形成了化合物而引起的静态猝灭。故用静态猝灭 裹2瞢拉宗与Bs^，lISA的鸯}i合撒(i．．／m01) 公式‘引： 墨鏖盟 幽型垒L——．—鱼坚!!!