分子生物技术在植物线虫学中的应用.pdfVIP

塞塑竺：坌王生塑垫查壅塑塑垡当堂鱼塑堕旦 e0． 分子生物技术在植物线虫学中的应用 八v Jr，． 袁斌 彭德良 (中国农业科学院植物保护研究所北京 100094) 摘要本文简要综述了生物技术近年来在植物线虫学研究巾几个领域的应用，包括植物线 虫种类的鉴定、植物线虫与寄主的相互作丌1、寄主抗性、生防、虫口动态等。 关键词生物技术植物线虫 生物技术的飞速发展为研究植物一病原物之间的相互作用，提供了新的、强有力的 工具和手段，使人们对它们之间关系的认识有了质的变化。植物寄生线虫给水果产量、 粮食产量造成严重的损害。随着人口不断增加，要求粮食产量越来越高，植物线虫研究 显得越来越重要。近年来，植物线虫研究的各个领域使用了各种各样的生物技术。研究 方面包括种的鉴定、小种和病理型的鉴定、抗病育种、植物线虫与寄主的柑互作用、植 物线虫虫口动态、优化轮作制度，生物防治和生防试剂等。 l植物线虫利喽鉴定 准确地鉴定植物线虫的种类是植物线虫学研究植物线虫防治，尤其是不用杀线剂防 治植物线虫的基础。传统鉴定的方法是通过形态学鉴定，由于受环境和地理条件的影响 相当大，有时并不可靠。特别是在利t问进行鉴定时，难以找到合适特征。植物线虫研究 应用分子生物学技术的直接目的就是使得鉴别植物线虫种类容易、准确和快速。鉴定植 物线虫种类分子标{dV,J使用增加了在样品中的鉴定的敏感性，加快了鉴定的速度。生物 技术直接检测植物线虫的基因组，排除了环境变化的影响，从而快速准确地鉴定植物线 有人进行过综述，这里不再详叙。 1．1 随机扩增多态性DNA(RAPD)；fnRAPD标记 通过扩增染色体组DNA标记是一十分有效的方法。在作用ERAPD与RFLP类似，但 体顺序。用PCR技术只需微量的DXA，并且口r队用于单个J2和单个孢粪的鉴定。在根结 线虫鉴定中，对J2的鉴定特别有实用价值。RAPD分析可以成功地利用．T2区分花生根结 的6个地理种群间的差异。用RAPD研究马铃薯金线虫和马铃薯白线虫种问和种内的差异， 80 植物保护2l世纪展越 囊线虫和不列颠病理型两个组，并澄清了禾谷孢受线虫组中的原先的复杂关系。 由RAPD扩增获得的DSA片断经鉴定席证明可以用作分子标记的称之为RAPD标记。 杂交，那些与单拷贝或低拷贝数DSA片断杂交的扩增产物就可队用作分子标记。研究人 员通过对根结线虫的RAPD标记片断克隆并进行测序，设计出一种专化性引物专门扩增标 记片断，大大简化了RAPD标记检测程序。使用这种一?化性引物可以很轻易地将北方根结 线虫和奇特伍德根结线虫与其他几种根结线虫区分开张。 有研究是依据核糖体重复ITS区的差异作为标记的，一些滑刃线虫和茎线虫种和生 理小种的鉴定就是依据于此。在剑线虫组中ITS的相当大的差异也被观察到。但报道在 几种根结线虫种间或种内的ITSI和ITS2区没有发现有差异。据报道核糖体重复的IGS 区比ITS区有更大的变异，在相关种问很少保守。有人研究得出结论，南方根结线虫、 爪哇根结线虫，花生根结线虫之问有较近的亲缘关系。 1 2扩增片断长度多态性(AFLP) 用更严格的反应条件，以获得更好的扩增产物。AFLP技术可以定量分析，因此它可以作 为共显性标记。在根结线虫的研究中，使用了两种方法。其一，根据线粒体的可变数目 串联重复(VSTRs)在不同根结线虫线粒体的重复数目：差异，扩增后电泳，比较带的差异， 再进行计算确定它们之间的亲缘关系。目前，发现了根结线虫8、63、102碱基对的重复 单元，63bp的重复单元顺序已经被测序。据此设计出专化性引物，扩增63bp单元。由于 引物是专化性的，所以扩增产物也是特定的，电泳谱带所反应的是VNTRS在线虫中的分 布。在根据公式K=1一∑nn=OX21计算分布情况，可以得出它们的亲缘关系。其二，RAPs 是在串联重复序列内或附近的点突变，并且在线粒体中这种点突变发生的频率比较高， 鉴定，显示它们的研究结果是一致的。 2植物线虫群体动态变化与防治 2．1 耕地里植物线虫的动态变化 花生根结线虫、南方根结线虫、爪畦根结线虫在各地往往同时存在，给轮作减少植 物线虫虫口带来很大的困难。其qt部分原因就在于无法准确地知道轮作前后土壤中植物