对氨基酸纸层析实验的改进.pdfVIP

山西医科大学学报 JShanxiMedUniv 2011年 3月，42 3 ·273 · 对氨基酸纸层析实验的改进 陈舒丽， 王梅娟， 罗丽丹 ， 刘汉才， 罗德生 咸宁学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室，成宁 437100； 通讯作者，E—mail：jxal2419@ 126．eom 摘要： 目的 对传统的 “氨基酸纸层析”实验进行改进，力求寻找一种无毒的展层剂，且操作更简便的实验方法。 方法 利用不 同浓度 的乙醇溶液对混合氨基酸进行分离，与水饱和苯酚 的分离效果进行 比较 。 结果 3种不 同浓度的乙醇展层剂 均可将混合氨基酸分离，但 75％的乙醇分离混合氨基酸效果最好；且将茚三酮溶于展层剂中显色比先展开再显色的效果更 好。 结论 通过实验改进，不仅实验效果满意，简化了实验步骤，缩短了实验时间，而且对人体没有任何毒性和腐蚀性，达 到了预期的效果。 关键词： 氨基酸； 纸层析； 展层剂； 迁移率； 显色 中图分类号 ： R一331 文献标志码 ： A 文章编号： 1007—6611 2011 03—0273—02 DOI：10．3969／J．ISSN．1007—6611．2011．03．030 纸层析是以滤纸作为支持物分离混合物的一种 在滤纸圆心处打一小孔 如铅笔芯大小 ，另取 分配层析方法。滤纸纤维和水有较强的亲和力 ，与 一 条状滤纸 ，长约 4em，宽约 2cm，下一半剪成须 有机溶剂的亲和力很弱。故而在层析时，以滤纸纤 状，卷成圆筒，如灯芯插入小孑L，勿使其突出滤纸面。 维及其结合的水作为同定相，以有机溶剂作为流动 1．2．2 层析和显色 在 8个直径为 10em 的圆形 相。当流动相沿纸经过样 品时，样 品点上的溶质在 层析缸 中分别加入 4种不同的展层剂 ，即水饱和苯 水和有机相之间不断进行分配 ，随着流动相的不 断 酚 ，65％，75％，85％乙醇溶液 含 0．1％茚三酮 ，每 移动 ，各种不 同的部分按其各 自的分配系数不断进 种溶液均平行做 2份 。把滤纸平放在展层缸上 ，使 行分配，从而使物质得到分离和提纯 ¨。纸层析法 灯芯浸人展层剂 中，溶剂沿灯芯上升到滤纸 ，并 向四 是常用的一种分离混合氨基酸的方法，也是大中专 周扩散，待溶剂前沿扩散至滤纸边缘约 1cm时，取 院校生物化学实验 中的一个常规性实验。在多年的 出滤纸，用铅笔划出溶剂前沿，在烤箱中烤干。由于 实验教学 中，我们发现有些试剂及实验步骤需要改 乙醇展层剂中直接加入了茚三酮，故从烤箱中取出 进。传统实验中，通常用苯酚做展层剂。苯酚是一 的6张滤纸上有紫色的弧形色斑 ；用水饱和苯酚做 展层剂的滤纸拿 出后喷0．1％茚三酮溶液，放人烤 种有毒物质，对皮肤有较强的腐蚀性，对人体毒性较 箱中第二次烤干，出现紫色的弧形色斑。用铅笔描 大 ，而且价格较贵。传统实验 中，氨基酸层析完毕 出色斑轮廓，取两份平行结果的平均值，以下列公式 后，用茚三酮溶液喷雾显色，由于喷雾不均，容易造 计算迁移率 Rf ： 成显色不均。本研究将茚三酮加入展层剂 中，通过 。 ， 样品原点到斑点中心的距离 比较苯酚与 3种浓度不 同的乙醇作为展层剂 的效 一样品原点到溶剂前沿的距离。 果，从而降低实验试剂对人体的危害，简化实验步 2 结果 骤，降低实验成本，现报告如下。 经过展层作用后 ，谷氨酸与丙氨酸在 4种展层 1 材料与方法 剂中的迁移率见表 1，层析图谱见图1—4。 1．1 实验材料 0．1mol／L丙氨酸溶液，0．1mol／L 谷氨酸溶液，0．1mol／L丙氨酸及谷氨酸混合液，0．01 表 1 两种氨基酸在 四种配方 中的迁移率 mol／L pH7．4 磷酸盐缓冲液，0．1％茚三酮溶液，水 饱和苯酚溶液，65％，75％，85％乙醇一茚三酮溶液。 1．2 实验方法 1．2．1 点样 取直径 10em圆形滤纸一张，用圆规 作半径 0．8cm的同心圆，将 圆周平均分成三部分， 通过计算 2种氨基酸的 值及 8张滤纸的层 分别标记 1，2，3。用毛细管在滤纸的 1处点加丙氨 析图谱结果可以看到：点样 1处的混合氨基酸均可 酸和谷氨酸混合液2滴，2和 3两处分别点加丙氨 以分离，离点样点较远的斑点为丙氨酸，离点样点较 酸和谷氨酸溶液各 1滴。 近的斑点为谷氨酸；水饱和苯酚溶液和75％乙醇分 · 274 · 山西医科大学学报 JShanxiMedUniv 2011年 3月，42 3 A．水饱和苯酚 B．75％乙醇 C．65％乙醇 D．85％乙醇 罔 1 不同展层剂的层析 图谱 离氨基酸的效果最为明显，且 2种氨基酸在 2种展 剂沿滤纸向四周扩散 ，由于同定了显色剂的量 ，故从 层剂