流式细胞仪检测白细胞髓过氧化物酶的方法研究.pdfVIP

检验医学与临床 2011年 3月第 8卷第 6期 IabMedClin，March201l，Vo1．8，No．6 · 657 · · 论 著 · 流式细胞仪检测 白细胞髓过氧化物酶的方法研究 崇慧峰 ，丁天凌”，关蓓倩。，朱 萍 1．安徽省铜陵市人民医院检验科 244000；2．上海华山 医院血 液科 200040 【摘要】 目的 评 价流式细胞仪检 测胞浆 内抗原髓过氧化 物酶 MPO 的方 法，探讨 实验 中各 因素时检 测结果 的影响 。方法 以HI60细胞为模型 ，多参数流式细胞仪分析 ，比较 3种不 同破膜剂处理及不 同处理 时间，标本不 同放置 时间，不 同荧光染料对 实验结果 的影响 。结果 比较 FACS、Fix Perm 、Fixation ，Permeabilization3种破 膜剂 ，得 出FACS破膜剂对 细胞 的前向散 射 角／侧 向散 射 角 FSC／SSC 影响最小 ，相对 荧光 强度 RFI 明显 高于其 他两者 ，效果最佳 。3种破膜剂均在破膜 时间 l5rain时可达到最佳效果 。标本放置在 室温条件 下，12h内应对其 进行处理 ，至 24h细胞 已出现部分死亡，将影 响实验结果的正确性 。PE荧光的MPO在荧光强度上明显优于FITC 荧光 ，因此推 荐在 务件允许的情 况下，尽 可能地选 用PE 荧光 的MPO抗 体。结论 流式细胞仪检 测MPO的推荐方 法 ：调整样本 细胞 数 ，应 用FACS破膜剂 l5min，标本 必须当天完成检测 ，尽 量采用 PE标记的 MPO抗 体。 【关键词】 髓过氧化物酶 ； 流式细胞 术； 胞浆 内抗原 DOI：10．3969／j．issn．1672-9455．2011．06．007 文献标志码 ：A 文章编号 ：1座机电话号码 2011 06-065702 DetectionofcytoplasmicantigenMPO byflow cytometry CHONG Huifeng ．DINGTian—ling ，WU Beiqian ． ZHUPing 1．Departmento／ClinicalLaboratory，TonglingPeoplesHospital，Tongling，Anhui244000，China； 2．DepartmentofHematology，HuashanHospital，Shanghai200040，China [Abstract] Objective Toexploretheexaminationmethodofcytoplasmicantigenmyeloidperoxidase MPO andto study thefactorsaffecting theflow cytometryanalysis．M ethods W ith HL一 60 cellsasmodel，multiplepa rametersflow cytometrywasusedtoanalyzetheeffectofthreekindsoffixationandpermeabilizationprocedure，dif一 erentcolor direct immunofluerescence staining and differentsample treatmenttimeon theexperimentalresults． Results FACSpermeabilizationhadthebesteffect，withtheminimalinfluenceofforwardscatter／sidescatter FSC／ SSC andhighestrelativefluorescenceintensity RFI ．15minofpermeabilizationwasenough．Inordinarytempera ture，thesampleshouldbetreatedwithin 12h，atthemostextending to24h．PE stainedM PO wasbetterthanFITC andthePE stained MPO wassuggested．Conclusion Thestandardmethod ofdetecting MP issuggestedasfol lows：usingtheFACS permeabilizationfor15rain，choosingthePE stainedantibodiesandsampleshouldbecomple— tedthedetection on thesameday． [Keywords] my