海产养殖饵料四爿藻的生长评价.pdfVIP

2011，v0I．28No．3亿 学与生 物 Z程 Chemistry Bioengineering doi：i0．3969／j．issn．1672—5425．2011．03．020 海产养殖饵料 四爿藻的生长评价 李红丽 ‘。胡鸿钧 ，李夜光 ，欧阳叶新 1．中南民族大学工商学院，湖北 武汉 430065；2．中国科学院武汉植物研究所，湖北 武汉 430074 摘 要 ：对 目前普遍采用的四爿藻生物量累积时期生长状况的评价方法进行 了比较 ，通过测定 3种四爿藻的细胞数 日、叶绿索a和叶绿素b的含量变化及几种波长下的特征光密度 吸收值，分别绘制生长 曲线。结果表 明，叶绿素 b含量 变化和 0D 。、OD 、0D 变化与生长趋势不太吻合，而叶绿素 a含量变化和细胞数 目变化较为一致，呈现较为规则的 指数生长曲线。这说 明利用叶绿素a含量变化评价四爿藻生长状况较为可靠，而且可以通过测定光密度值直接获得 ，方 便 快捷 ，适合 于大规模生产海产养殖饵料 的需要 。 关键词 ：四爿藻 ；生长评价；细胞计数 ；叶绿素；OD值 · 中图分类号 ：Q949．211 文献标识码 ：A 文章编号 ：1672—5425 2011 03—0070—04 四爿藻 Tetraselmis 是一类单细胞绿藻口]，因其 四爿藻 TetraselmischuiWHO1 、心形 四爿藻 7、． 特殊的系统位置和化学组成，近来受到国际学者的普 cordiformisWH02 ，采 自山东省青岛市沿海地 区；大 遍关注 ]。四爿藻含叶绿素 a、叶绿素 b及丰富 的营 四爿藻 T．helgolandicaWH03 ，采 自浙江省象 山 养物质，作为饵料广泛用于水产养殖 [3]。四爿藻生 县。藻种 由中科院武汉植物研究所藻种库提供 。 活史包括运动的四鞭毛期 生物量累积时期 和不运动 1．2 四爿藻的培养 的营养细胞期 静止相 ，饵料生产要求收获运动 的四 将 3种四爿藻藻种接种于改良的适合于水产养殖 鞭毛期细胞。在人工大规模培养四爿藻饵料过程 中， 的四爿藻培养基 中，置于 RH一150-G型恒温光照培 需要及时检测四爿藻的生长情况。 目前，评价绿藻生 养箱中 20±2 ℃下持续光照培养，光强 2000～ 4000 长状况 的方法主要有细胞计数法、活体细胞荧光法和 lx，摇床转速 12Or·min 。 叶绿素含量分光光度计检测法 ¨6]。其中活体细胞荧光 1．3 四爿藻的生长评价 法需要昂贵的仪器设备，理论复杂，人为误差较大 ，实 1．3．1 细胞计数 际运用较少。细胞计数法较为可靠 ，但需要显微镜和 分别取 待测 的 四爿藻 培养物 培养 前 6d ，用 专业人员进行测定 ，而且运用比较麻烦，不适合普通 Lugol氏固定液固定，血球计数法计数。每样品重复 4 人员进行大规模培养时采用。藻类细胞含有进行光合 次 ，求平均值 ，绘制生长 曲线 。 作用的捕光色素分子和代谢衍生物 ，利用其特征光密 1．3．2 叶绿素含量测定 度吸收值表示细胞密度 已有大量报道l_7]。作者在此对 采用快速微量提取法进行[6]，略作改动。离心收 普遍采用的四爿藻生物量累积时期生长状况的评价方 获不同生长期 的四爿藻培养物，加入 95 乙醇研磨 法进行比较，旨在寻找适合于评价 四爿藻生活史运动 补足体积 后 室温下抽提 4～6h，离心取上清，乙醇 时期细胞生长状况的准确 、简便、快捷的方法。 重提，直至抽提充分 共抽提 3次 。合并上清，用 722 型分光光度计检测 0D。。和 0D 值 。根据下面公式 1 实验 计算叶绿素 a Chla 、叶绿素 b Chlb 的含量 ttg · 1．1 材料 mI ，每样品重复 4次，求平均值，绘制生长曲线并 实验所用藻种为 3个不 同种 的海洋 四爿藻 ：朱 氏 与细胞计数法绘制的生长 曲线进行比较 。 基金项 目：中国科 学院武汉植 物研 究所所长基金 资助 收稿 日期 ：2010—01—06 作者简介 ：李红丽 1977一 ，女 ，河南开封人 ，讲 师，主要从事植物组培 方面的研 究；通讯作 者：欧 阳叶新，研 究员。E—mail：ouyang@ vaxa．cis．uwosh．edu。 李红丽等 ：海产养殖饵料四爿藻的生长评价／2011年鞭 3期 Chla含 量 一 13．7×oD 一 5．76×ODs。 采用 Originv6．0作 图，分析生长 曲线 的差异 ，并 Chlb含量 一 25．8×0D 。一7．6×OD66j 对 3种 四爿藻据 叶绿素 a的平均含量绘制 的生长 曲线 1．3．3 特定光密度值测定 进行 回归，并与细胞计数法得到的生长 曲线 回归