肠道病毒71型结构蛋白VP1的原核表达及初步鉴定.pdfVIP

山东医药2011年筮 鲞 ! 肠道病毒 71型结构蛋 白VP1的原核表达 及初步鉴定 岳盈盈，李志会 。李 鹏 ，宋楠楠 ，赵元昊。孟 红’ 山东省医学科学院基础医学研究所，山东省罕少见病重点实验室，济南250062 摘要：目的 利用大肠杆菌表达系统表达Ev71VP1蛋白并对其抗原性进行初步鉴定；为EV71疫苗研制奠定 基础。方法 采用PCR扩增 Ev7lVP1基 因2-274aa片段，并将其插入表达载体 pEq30a + ，转化 Transetta DE3 菌株，SDS． 相对分子质量约为30kD的融合蛋白，WesternBlot证实其抗原性 良好；该蛋白的最佳表达条件是37℃、1．0reotol／ LIPTG、诱导表达4h。结论 表达并鉴定了EV71VP1抗原；本研究为EV71疫苗研制及检测试剂盒的建立奠定了 基础 。 关键词：肠道病毒 71型；VP1蛋 白；原核表达 中图分类号：11373．2 文献标志码：A 文章编号：1002—266X 2011 07-13022-03 Prokaryoticexpressionandinitialidentificationofenterovirus71structuraIproteinVP1 YUE Ying- ，LIZ九—hui，LIPeng，SONGNan—nan，ZHAOYuan—hao，MENGHong InstituteofBasicMedicine，ShandongAcademyofMedcialSciences，KeyLaboratoryofRareandUncommonDisea s ，J／nan250062，P．R．China Abstract：Objective Toexpressthestmctud proteinVP1ofenterovlrus71inE．coli，andidentifyitsantigenieity initially．Methods ThetargetgenewasamplifiedbyPCRandclonde intoexpressionvectorpE130a + ．Therecombi— nantplasmidwastransformatedintoE．coliTransetta DE3 ，theexpressionandnatigenieityofrecombinantproteinwas naalyzedinitiallybySDS Results Th efusionproteinabout30kDWas obtainde ，andWestem Blotassaysshowedithadgoodantigenieity；thebest expressionconditionwas37oC．1．0mmol／LIPTGnad4h．Condusions EV7lVP1antigencartbe expressednadiden- ti6ed：tlIisswayprovidesfoundationfortllevaceinalresearchnadmanufacturetlledetectionkitof EV71． Keywords：enterovlrus71；VPIprotein；prokaryotieexpression 手足 口病 HFMD 是全球性传染病。引起 1．1 材料 RD细胞由山东省疾控中心赠送 ；EV71 HFMD的肠道病毒有 20多种 型 ，以肠道病毒7l 病毒株、E．eoliTOPIO、PET30a + 为本室保存 ； 型 EV71 和柯萨奇病毒 A16最为常见；其中EV71 Transetta DE3 购 自北京全式金生物技术有限公 引起的HFMD最为严重 ，可引起心肌炎、肺水肿、脑 司；pMD18一T载体、限制性 内切酶及蛋 白酶购 自大 膜脑炎、脊髓灰质炎样瘫痪等并发症 ]，病死率高。 连宝生物工程公司；1640培养基购 自GIBCO公司； 目前临床对EV71感染以对症治疗为主，尚无有效 D2000DNAmarker、Taq酶、RNA提取试剂盒、质粒 的抗病毒药物。研制安全有效的疫苗和早期诊断试 纯化试剂盒及DNA凝胶电泳回收试剂盒购 自北京 剂盒是防控 EV71感染的当务之急。2010年 2月， 泰天河生物技术有限公司；其他试剂均为进 口或国 我们采用大肠杆菌表达系统对EV71VP1蛋白的第 产分析纯。 2-274aa进行表达及鉴定，并对其表达条件进行优 1．2 目的基因选择及引物设计 查阅Genbank中 化，旨在为EV71疫苗的研究和检测试剂盒的建立 VP1基因序列设计引物，在上游引物5端引入Nde 奠定基础 。 I酶切位点 CATATG ，