减毒沙门氏菌介导猪轮状病毒VP7、NSP4基因疫苗的构建及其小鼠免疫试验的研究.pdfVIP

484蟋》2011年学术年会 T030128 减毒沙门氏菌介导猪轮状病毒 VP7、NSP4基因疫苗的构建及其小鼠免疫试验研究 熊俊文心田 黄小波曹三杰 (四川农业大学动物医学院，四川雅安625014) 引言／目的 猪轮状病毒感染是一种猪的急性肠道传染病，造成仔猪严重腹泻和脱水，仔猪病死率高，给养猪业 带来巨大损失。本研究拟构建以减毒沙门氏菌为运送载体的IsIn[iDNA疫苗，通过相互比较之间诱导机 体产生特异体液抗体和黏膜抗体的水平差异，探索能提高疫苗稳定性、安全性、有效性的方法，为研制 新型高效、稳定、安全的猪轮状病毒疫苗提供新的思路。 材料方法 4550。提取重 达质粒和双表达质粒，经电转化沙门氏菌X3730，再从中提取质粒电转化减毒沙门氏菌X 组质粒转染COS．7细胞，分别以制备的免疫血清为抗体血清，进行间接免疫荧光试验。重组减毒沙门氏 菌口服免疫小鼠，间接ELISA检测抗体水平。 结果 经RT-PCR成功扩增VP7的序列1062 NSP4基因原核表达载体经诱导分别表达出约30KD瘌28KDa的融合蛋白。经菌落PCR和酶切鉴定，表 明重组减毒沙门氏菌疫苗均构建成功。间接免疫荧光试验，表明重组质粒能在COS一7细胞中表达。间接 ELISA检测结果显示双表达质粒组和混合质粒组诱导小鼠产生的血清特异抗体IgG和肠道黏膜抗体IgA 水平高于单表达质粒组。 讨论 联合免疫方式进行效果比较，结果显示NSP4单表达疫苗的免疫原性最低，所诱导的NSP4蛋白抗体水平 较低，而双表达疫苗诱导产生的特异抗体水平显著高于单表达各组。表明NSP4构建的单表达疫苗免疫 高。双表达质粒免疫效果提高的机制一方面可能是由于NSP4蛋白发挥的免疫增强作用，另一方面可能 是由于抗原蛋白种类的增多，两种抗原蛋白诱导产生抗体，增强了疫苗的免疫原性，其作用机制有待进 一步研究。