微流控芯片连续流动型电化学生物传感器.pdfVIP

微流控芯片实验室进展 微流控芯片连续流动型电化学生物传 闻艳艳，白晓琳，方芳，吴志勇‘ 东北大学分析科学研究所，沈阳110004 戊二醛与带有氨基的壳聚糖网状结构共价键合，同时壳聚糖具有良好的吸附性能，分子 中的氨基、羟基对具有一定离子半径的一些过渡金属具有鳌合作用，屏蔽了过渡金属离子对 酶的抑制作用[1-3]。我们利用玻璃光刻的方法加工制备了一种透明的芯片流动电解池，已 经成功的用于电化学及电化学发光测定[4】。本文在传统的园盘酶修饰电极研究的基础上， 利用芯片电化学检测池的特点，采用毛细管微反应器的方法研究了连续流动的电化学生物传 感检测方法，以葡萄糖传感为例进行研究，借助电子传递介质对苯醌降低了电活性物质抗坏 血酸对测定过程的干扰。 结果与讨论 微流控芯片采用玻璃光刻方法制备，具体方法参见文献[4】。检测池长度10mm，宽度 400um，两个50um的Pt丝电极通过电极通道插入检测池，并用通道中的定位脊分别定位在 通道两侧，分别作为工作电极和对极，参比电极用自制的Ag／AgCl电极置于接口储液池中， 该接口同时与注射泵相连接。毛细管酶反应器与检测池通道的进口连接。毛细管可直接插入 样品液中在泵的拉动下进入检测池，样品的更换操作通过变换与毛细管连接的样品管即可。 石英毛细管(i．d．2501Jm)先进行洗涤及粗糙化处理，后对毛细管进行硅烷化处理，戊 二醛表面处理，最后注入葡萄糖氧化酶(GOD)或葡萄糖氧化酶与壳聚糖(CS)混合物， 于4C冰箱中放置孵化一夜，用pH7．0磷酸缓冲溶液(PBS)清洗酶反应柱后存于4C冰箱 中备用。 结果与讨论 利用毛细管酶反应器和电化学检测芯片得到的循环伏安曲线如图2所示，含有5mmol／L 葡萄糖的磷酸盐缓冲溶液较仅含磷酸盐缓冲溶液有明显的氧化还原峰，表明固定化的酶有很 好的活性。计时安培检测表明，响应电流随电位的增加而增加。仅涂GOD的石英毛细管反应 器在pH6．6有最大值，而GOD：CS=I：1混合石英毛细管反应器在6．2—7．2范围内基本不受 pH变化的影响。 流速实验表明，流量大于3皿／min后两种毛细管酶反应器的响应均有明显降低，表明 停留时间较短，酶反应不够充分。相同条件下仅涂GOD石英毛细管酶反应器线性范围为： 0．5．10mmol／L，相关系数R=0．998，检出限为0．25 石英毛细管酶反应器线性范围为：0．1．10 比S仓『_3)。 分别对仅涂葡萄糖氧化酶(GOD)及葡萄糖与壳聚糖混合物(GOD：CS=1：1)两石英毛 mmol／L的葡萄糖进行测定，前者变异系数在 细管酶反应器分别对浓度为5mmol／L及10 。 3．2％以下，后者在5％以下。将制备好的石英毛细管反应器4C冰箱中储存两个月后测试， 壳聚糖的引入大大提高了固定酶的稳定性。 对含有500 Cu2+、pb2+、Cd2+、C，以壳聚糖与葡萄糖氧化酶l：l混合制成的石英毛 ng／mL 细管酶反应器进行测定，对葡萄糖氧化酶的酶抑制率分别为4．4％、3．5％、6．6％、10．5％。 模拟人血成分测定5mmol／L葡萄糖溶液，当溶液中抗坏血酸浓度为0．01mmol／L时干扰率 3．3％，而引入电子传递介质对苯醌后在工作电位0．3V下，抗坏血酸浓度为0．1mmol／L对 通讯联系人：吴恚勇 芯片检测技术 5mmol／L 葡萄糖的干扰率仅为5．7％。图2为有电子传递介质情况下的计时安培信号响应曲线，为不 同浓度葡萄糖响应曲线叠加结果，在30秒内实现平衡响应。随着芯片检测池的进一步减小 及毛细管反应器之间的连接死体积的减小，该时间可以大大缩短。 游离酶对环境变化的耐受力极低，而固定化酶具有游离酶无法比拟的优势，它对温度、 pH值、溶剂极性等具有极高的耐受性。与均相酶反应相比，固定化的酶具有更高的酶／底物 比、更高的酶解效率、可重复使用并能减少酶的自身降解等优点。 利用微反应器和微型流动检测池的一个突出特点是达到了修饰电极检测效果的同时使 检测池的体积大大缩小，通过毛细管微反应器的切换可能还可用于多个组分的选择性检测。 未来微酶反应器还可以与微电极直