增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠的保护力及其机制的研究.pdfVIP

568 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠的 保护力及其机制研究 王勇“2，刘思国”，王春来‘，邵美丽“。，刘建东1，宫强1，迟磊1，赵昆’，郭设平1，李广兴2 (1中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究窀哈尔滨150001； 2东北农业大学哈尔滨150030) 摘要：为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力，本研究利用基因重组技术表达的猪传染性胸膜肺 BALB，c 小鼠，分3次免疫，每次间隔2周，每周检测血清抗体水平，在免疫后第2周、第4周和第5周，MIT法 检测脾脏T细胞增殖水平及ELISA法测定IFN-I分泌水平．在第3次免疫后的第7天，将每组剩余20只小 向灭活苗中添加重组亚单位成分可以提高机体的细胞免疫和体藏免疫水平，并能提高灭活苗的交叉保护率； 型菌曲攻毒也提供了明显伉于其它各组的保护结果，试验III、】v组的细胞．体液免疫水平及保护率较试验I 组也有所提高．结果显示出Apxl、OMP抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率之间存在着正相关性，向灭 活苗中加入重组蛋白成分可以提高疫苗的交叉保护，试验lI组通过教活体液免疫和细胞免疫，对两个血清型 APP的攻击提供了很好的保护作用，从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考． 关键词：猪传染性胸膜肺炎；重组亚单位苗苗：保护力；抗体；淋巴细胞增殖；IFN-3； 猪传染性胸膜肺炎(porcinecontagious 该病可引起猪只的死亡和生长缓慢，严重影响着养猪业的健康发展。 目前该病的防疫主要以灭活苗免疫为主，但由于APP共有15个血清型，不同血清型之间的保护 力很低，加之灭活疫苗中缺少菌体在生长过程中分泌的毒素‘“】，而且在灭活过程中有些抗原成分可能 被破坏或丢失，所以灭活苗的保护效果并不理想”“，研制新型疫苗已迫在眉睫。各种新疫苗中研究较 11、 多的是以APP的主要毒力因子为成分的亚单位疫苗。APP的主要毒力因子包括毒素(ApxI、Apx Apx 糖与脂多糖”l、转铁结合蛋白与脂蛋白”1等两种抗原混合的亚单位疫苗能提供有效的同型保护，而更多 组分的亚单位疫苗(如以Apx 均有较高的保护“…，向灭活苗中加入ApxI、ApxII、ApxllI的亚单位成分也可以对同型和异型菌的攻 毒提供很高的保护率““。 (灭活苗、rApxl、rApxII、rApxⅢ、rOMP)，试验Ⅲ组(灭活苗、rApx ’通讯作者：Email：Is9960@sohu．com．Tel：0451 作者简介：王勇(198l一)，男，黑龙江哈尔滨人，东北农业大学动物医学院在读硕士研究生 主要从事瘐病免疫预防方面的研究。 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 569 对各组小鼠体液及细胞免疫的监测和攻毒试验来检测疫苗的保护效果，进一步研究其免疫机理，希望 重组蛋白作为添加成分能够提高灭活苗的交叉保护力，减轻病变，从而筛选出较为合理的疫苗组合， 为新型疫苗的研究奠定基础。 1材料与方法 1．1菌种 4074株)、APP7型菌(国内分离株)参考株由本实验室鉴定并保存。 APPI型菌(Shope 1．2主要试剂 MTT、ConA、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂购自sigma公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠 ELISA试剂盒购自武汉博士德 IgG购自北京中杉金桥公司；RPMll640购自Hyclone公司；小鼠IFN-T 生物工程有限公司。 1．3 rApxl、rApxll、rApxlll、rApxlV、rOMP和rApfa蛋白的制备 TrionX一100、lmM 1．4动物免疫 1．4．1疫苗的制备 100pg／ml，对照组采用PBS制作。首次免疫采用弗氏完全佐剂，二免和三免采用弗氏