黄芪-脉络宁胶原促进体外胸主动脉内皮细胞血管新生的实验研究.pdfVIP

蕾■珥掌 杂志，201I，21(I)：8--I1 ◎ 2011 CHINESEJOURNALOFMICROCIRCULATION 黄芪一脉络宁胶原促进体外胸主动脉 内皮细胞血管新生的实验研究* 薛 涛 陈建东 姚 昶 [中图分类号] R285．5 [文献标识码] A [文章编号] 1005—1740(2011)01一O0O8一O4 新生的细胞学过程主要是血管内皮细胞增 公司产品，CKX41SF倒置显微镜为 日本 Olympus 、 迁移和管腔形成的过程 。血管新生开 公司产品，超净工作台为上海AirTech公司产品。 时 ，内皮细胞原来相对静止的状态被打破， 1．1．2 黄芪一脉络 宁胶原 的制备 ：胶原 由DrSu- 细胞开始增殖并合成 、分泌促血管新生蛋白。许多 welackSkin＆HealthCare公司(Billerback，德国) 生长因子，如血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、血管 无偿提供 。为 I型牛胶原，由冻干法制成 ，孔径在 生成素一2(Angiopoietin-2，Ang一2)和碱性成纤维细 15～25p．m 之 间，成孔率约 98 ，胶 原制成直径 胞生长因子 (bFGF)，通 过不同的途径 调节血管新 5mm、厚度 lmm 圆柱体进行修饰 ，胶原修饰过程与 生 [2]，使内皮细胞激活而发生增殖和迁移，并在迁移 Wissink等 的方法基本相同，修饰完成后冷冻干 过程中不断分泌蛋 白水解酶 ，降解基质重构。最终 燥 ，密封后以钴 ℃0照射灭菌备用 ；实验时在层流台 完成血管新生口]。而我们前期研究表明黄芪胶原及 中将实验组载入黄芪注射液 (成都地奥九泓制药厂 ， 黄芪一脉络宁胶原具有显著促进鸡胚尿囊膜血管新 批号 ：0603O18)及脉络宁注射液 (金陵药业股份有限 生及大鼠组织修复作用 ，疗效以黄芪一脉络宁胶原为 公司，批号：200705183)各 lOl，对照组载人 200tA 佳[引。本研究据此对黄芪一脉络宁胶原促进体外血 生理盐水 ，30min后 ，药物完全载入胶原，分别加入 管新生的效果及机制作初步探讨 。 细胞培养皿 中。 1．2 方法 1 材料与方法 1．2．1 大鼠胸主动脉内皮细胞的培养：实验大鼠乌 1．1 材料 拉坦麻醉后，酒精体表消毒，自侧腹部剪开皮肤，从 ● 1．1．1 实验动物、仪器和试剂 远心端开始分离，取 出胸主动脉。放入盛有 健康清洁级 SD大鼠，重量约 180g，雌雄不限， Hanks液的培养皿 中，去 除血污及周 围组织 ，获干 购 自南京医科大学实验动物中心；DMEM 培养基购 净光滑的血管段，转移入另～盛有 D-Hanks液的培 自美国Invitrogen公司，胎牛血清购 自杭州 四季青 养皿中，左手用眼科镊固定血管段一端 ，右手用刀片 生物公司，非必需氨基 酸购 自美 国 Sigma公 司，细 轻刮去外膜结缔组织 ，再用眼科剪小心剖开血管，将 胞增殖检测试剂 WST-1购 自德 国罗 氏公 司，Clin— 血管段剪成 lmm。大小的组织块 ，均匀贴放于培养 iBio128D型酶标仪，Transwell小室购 自美国Cost— 瓶底部 ，组织块 间隙约 2～3ram，加入含 1O 胎牛 ar公司，MatrigelMatrix购 自美 国BD公司，VEGF 血清的DMEM 培养液 2～3ml，轻摇 6孔板使培养 多抗购 自美 国 Abcam公 司， actin单抗购 自美 国 液掠过组织块 ，静置于 37℃，5 CO。培养箱中 7～9 Sigma公司，羊抗兔二抗 、兔抗 鼠二抗购 自丹麦 Da— 天 ，换液 ，之后每 3天换液一次。 ko公司。HeraCell二氧化碳培养箱为德国GmbH