急性白血病患者外周血HMGA1基因的表达.pdfVIP

m啊Ⅱ字 杂志，2009，19(4)：38～40 ◎ 2009 CHINESEJOURNALOFMICROCIRCULATION 急性 白血病患者外周血HMGA1基因的表达 郝明巨 李 稳 刘 敏 叶 翎。 [中图分类号] R733．71 [文献标识码] A [文章编号] 1005—1740(2009)04—0038—03 1．2 外周血单个核细胞分离 —固—一迁移率族蛋白AH(ighMobilityGroupPro一 常规抽取患者外周血 2ml，肝素抗凝，用淋巴细 胞分离液 (上海恒信化学试剂厂)分离单个核细胞， 计数 (5～10)×10细胞加 TRIzol总 RNA提取液 lml，混匀后一20℃冻存 (时 间少于 2个 月)用于 RNA制备。 1．3 RNA提取、定量及 cDNA合成 采用 TRIzol一步法提取单个核细胞总 RNA。 Backman-du800型紫外分光光度仪测定 OD2。、OD2 吸光值 比值介于 1．8～2．0之 间，证 明提取 的总 RNA纯度符合要求。计算 RNA含量 ：RNA浓度 (~／g／m1)===A26。×稀释倍数 ×40(A26。一1时的RNA 浓度为 40,／g／m1)l9]。按试剂盒 (日本 TaKaRa产 品)说明书合成 cDNA，--20℃保存备用 。 1．4 引物和探针 对照基 因为磷酸甘油醛脱氢酶 (GAPDH)，其 引物序列购 自达安基 因公司 ，上游引物：GAAGGT— GAAGGTCGGAGTC；下游引物 ：GAAGATGGT— GATGGGATTTC；HMGAl基 因上 游 引物为 5’。 GGCACTGAGAAGCGGGGCCG一3’，下游 引物 为 1 资料与方法 5’一CCCTTGTTTTTTGCTTCCCTT一3’。 1．1 研究对象 1．5 SYBRGreenIRQ—PCR方法 山东省 中医 院、济 宁市人 民医院住 院及 门诊 在 ABIPrism7300实时荧光定量 PCR仪 (美国 AL患者 3O例 (AL组 ，ALL5例和 AML25例)，均 运用生物系统公司)上进行实时定量扩增 ：取待测样 经临床、血象 、骨髓象及组织化学染色确诊，符合 白 品 cDNA 1l，加入 2×RealtimePCRMasterMix 血病FAB分型_8]，包括 ALL、M2、M。各 5例，M 6 4肚l，上 、下游引物各 0．51,1，去离子水 2／11，总反应体 例 ，M 7例 ，M 2例 。对照组 25例，为同期就诊的 系为 8t,1