ABCG2／Bcrpl可能是大鼠气管上皮干细胞的标记物.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(5)：1023—1024、1027 · 1023 · [文章编号] 1000—4718(200g)05—1023—03 · 短篇论著 · ABCG2／Bcrpl可能是大鼠气管上皮干细胞的标记物 丁 强 ， 杨 扬 ， 贾心善 ， 孙善亮 ， 马小波 (。中山大学基础医学院病理生理学教研室，广东 广州510080；2中国医科大学基础医学院病理学教研室，辽宁 沈阳 110001) [摘 要] 目的：探索气管上皮干细胞的表面标记物。方法：取 2周龄的Wistar大鼠，取 出气管环，5一FU 损伤 12h后 ，取气管上皮涂片进行增殖细胞核抗原、ABCG2／Bcrpl抗原染色、RT—PCR检测ABCG2／Bcrpl基因表 达。结果：5一FU损伤后大鼠气管上皮气管环的上皮全部脱落，残留问隔分布的裸核样细胞，基底膜完整。气管上 皮涂片免疫组织化学染色可见 PCNA染色阳性的细胞与阴性细胞间隔分布，间接免疫荧光染色可见 ABCG2／Bcrpl 阳性细胞；RT—PCR检测ABCG2／Bcrpl阳性反应产物与预计长度符合。结论 ：ABCG2／Bcrpl可以作为气管上皮干 细胞的标记，为进一步分离纯化扩增奠定基础。 [关键词] 气管上皮；干细胞；ABCG2／Bcrpl；氟脲嘧啶 [KEYWORDS] Trachealepithelial；Stemcells；ABCG2／Bcrpl；Fluorouracil [中图分类号] R329．2 【文献标识码] A 临床中许多疾病造成气管结构和功能的严重损伤，极大 min，蒸馏水洗，放入 Gomori六亚 甲基四胺银原液染液中2h 影响着患者的生存、生活质量，而气管重建又受到捐赠者缺 (5mL5％AgNO 加入到3％六亚甲基四胺 100mE)，蒸馏水 乏和器官排斥的瓶颈制约，近年气管组织工程的发展为患者 洗，0．2％氯化金调色，蒸馏水冲洗 3min，3次，2％硫代硫酸 带来新希望，有效地分离 、纯化气管上皮干细胞可以为气管 钠固定 3min，水洗行苏木素复染，脱水、透明和封固。 组织工程提供理想的种子细胞 ，因而需要寻找出气管上皮干 3 免疫组织化学检测增殖细胞核抗原的表达 细胞的表面标记物。1996年Goodell等 发现造血干细胞具 解剖镜下将气管黏膜层轻轻剥离，分散细胞使之涂于多 有排出荧光染料 Hoechst33342的特性 ，并使用荧光激活细胞 聚赖氨酸处理的载玻片上，4％多聚甲醛固定，采用 sP法 ，I 分选技术分离了侧群细胞即sP细胞，近年研究表明干细胞 抗用增殖细胞核抗原 (PCNA)，DAB显色 (PCNA抗体及 DBA 的这一特性与ATP结合盒 (ABC)转运蛋白超家族成员之一 显色试剂盒为福建迈新公司)，PBS缓冲液代替 I抗作阴性 对照，小细胞肺癌组织作阳性对照。 的ABCG2(又名乳癌耐药蛋 白1，Bcrp1)的表达有关。作者及 研究室以往的实验观察到气管上皮干细胞的存在，体内体外 4 间接免疫荧光法检测气管上皮ABCG2／Bcrpl的表达 同上法制备气管上皮涂片，非免疫动物血清封闭30min， 实验对其生物学性状进行了许多研究，发现气管上皮干细胞 加 I抗ABCG2／Bcrpl抗体 (Santa)，4℃过夜。TRITC标记兔 具有排出Hoechst33342的能力 ，那么气管上皮干细胞是否也 抗山羊 IgG(北京中山生物公司)，室温孵育 1h，用DAPI复染 有 ABCG2的表达，是否可能为气管上皮干细胞表面标记呢?