ADMA对内皮生长晕细胞凋亡及其相关p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响.pdfVIP

· 1052· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(6)：1052—1058 [文章编号] 1000—4718(2010)06—1052—07 ADMA对 内皮生长晕细胞凋亡及其相关 p38丝裂素 活化蛋 白激酶表达的影响 夏 雪， 张怀勤 ， 贾红梅 ， 林以诺， 黄伟剑， 叶 盛， 邵小琳 (温州医学院附属第一医院心内科，心血管生物和基因研究所 ，浙江 温州 325000) [摘 要] 目的：探讨非对称性二甲基精氨酸 (ADMA)对内皮生长晕细胞 (EOCs)凋亡和黏附能力的影响以 及凋亡相关p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的变化。方法：分离脐血中单个核细胞并原代培养扩增 内皮生长晕细胞，免疫细胞化学染色和荧光染色法鉴定其内皮细胞特性。将浓度为0、1、5、10、30p~nol／LADMA与 内皮生长晕细胞作用48h，流式细胞仪检测细胞凋亡率 ，DAPI染色及AnnexinV／PI双染观察凋亡细胞核形态变化。 在倒置显微镜下观察计数重黏附细胞数来测定细胞黏附能力。用特异性的phospho—p38MAPK抗体的Western blotting检测p38MAPK的活性。结果：采用贴壁法培养的细胞具有多种内皮细胞特性。ADMA(1—30pmol／L)诱 导内皮生长晕细胞的凋亡(P0．01)，同时ADMA(5—30wmol／L)使phospho—p38MAPK蛋白表达增加，两者作用 均呈浓度依赖性。ADMA作用组和对照组相比，激光共聚焦显微镜下可见更显著的细胞凋亡形态学改变。除 1~mol／LADMA外，5、10、30I~mol／LADMA均可抑制内皮生长晕细胞的黏附能力。结论 ：ADMA能诱导内皮生长 晕细胞发生凋亡并抑制其黏附能力，ADMA诱导内皮生长晕细胞发生凋亡可能与 p38MAPK磷酸化水平上升 有关。 【关键词] 精氨酸；内皮生长晕细胞；细胞凋亡 ；p38MAPK [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．06．003 Effectsofasymmetric dimethylarginine on apoptosisand expression of p38mitogen-·activatedproteinkinasein endothelialoutgrowthcells XIAXue，ZHANGHuai—qin，JIAHong—mei，LINYi—nuo，HUANGWei—jian，YE Sheng．SHAOXiao—lin (InstituteforCardiovascularBiologyandGene，DepartmentofCardoilogy，TheFirstAffiliatedHospitalofWenzhouMedical College．Wenzhou325000，China．E—mail：zhanghuaiqin@126．com) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheeffectsofasymmetricdimethylarginine(ADMA)onapoptosis，adhesion abilityandphosphorylationofp38mitogen—activatedproteinkinaseinendothelialoutgrowthcells(EOCs)．METHODS： Themononuclearcellswereharvestedfrom umbilicalcordbloodbyFicolldensitygradientcentrifugation，andinducedinto EOCsnadthenexpandedinvitro．Theendothelial characteristicsofEOCswereidentifiedbyimmunostainingnadfluores- centstaining．TheEOCsweretreatedwithdifferentconcentrations