AGEs对肾小管上皮细胞转分化、1型胶原合成及smad信号通路的影响.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 丝( )；璺垫 二塑 · 2429 · [文章编号] 1000-4718(2006)12—2429—05 AGEs对肾小管上皮细胞转分化、1型胶原合成 及 smad信号通路的影响 孙 辽 ， 余学清 ， 祝胜郎， 陈文芳， 李哓艳， 贾占军， 王 欣， 窦献蕊， 董秀清， 孙惠力 (中山大学附属第一医院肾内科 ，教育部及广东省肾脏病重点实验室，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：观察终末期糖基化终产物 (AGEs)对正常大鼠近端肾小管上皮细胞 (NRK52E)转分化 、colla- genI合成及Smads信号通路的影响。方法：应用 自制的AGEs(AGE—BSA)刺激NRK52E细胞，采用免疫细胞化学 方法检测pmad2／3核表达情况；ELISA方法检测细胞培养上清TGF—p。的浓度；RT—PCR检测 TGF—p．、Smad2、 Smad3和Smad7mRNA的表达；Western印迹检测 一平滑肌肌动蛋白(SMA)、E一钙粘着糖蛋白(cadherin)和 l型胶 原 (collagenI)蛋白的表达。结果：AGE—BSA刺激 15min后pSmad2／3核表达明显增加 ，于30min(68％)和24h (76％)出现两个高峰，与刺激前及时间匹配的BSA对照组比较均有显著差异 (P0．05)；AGE—BSA以时间依赖方 式上调 TGF—Bl、Smad2、Smad3和Smad7mRNA的表达 ；NRK52E细胞 —SMA和collagenI蛋白表达高于对照组 (P 0．01)，E—cadherin蛋白表达低于对照组 (P0．01)，细胞上清液TGF—B。的浓度高于对照组 (P0．01)。结论： AGEs可诱导肾小管上皮细胞 Smads信号通路活化，促进肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质collagenI的合成。 [关键词] 糖基化终产物，高级；胶原 I型；SmadmRNA [中图分类号] R363 [文献标识码] A Activationofsmadsignalingandcollagen IsynthesisinNRK52E cellsin- ducedbyadvanced glycationendproducts SUN Liao，YUXue—qing，ZHU Sheng—lang，CHEN Wen—fang，LIXiao—yan，JIA Zhan—jan，WANGXin，DOUXian—rui，DONGXiu—qing，SUNHui—li (DepartmentofNephrology，TheFirst够 Z Hospital，SunYat—sen,University，Guangzhou510080，Chn／a) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectsofadvancedglycationendproductsonactivationofSmadsignaling pahtwaynadcollagenIsynhtesisinproximaltubularepihtelialcells．METHODS：Advnacedglycationendproducts(AGE — BSA)werepreparedbyincubationofbovineseurmalbumin(BSA)withD— ucose．Normalratproximaltubulraepithe． 1ial (NRK52E)cellswereculturedinRPMI一1640mediumwithAGE—BSA．Phosphorylationnadnuclera translocationof Smad2／3wereexaminde byimmunocytochemistry．LevelsofTGF—BIinsupematnatofcellculturewere measuredbyen． zyme—linke