CCKB受体诱发的小鼠神经元蛋白质磷酸化的研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 20o8，24(1)：47—50 · 47 · [文章编号] 1000—4718(2008)01—0047—04 CCKB受体诱发的小鼠神经元 蛋 白质磷酸化的研究 何 涛， 李 娟， 王 丽，甘 淋， 宋 杰， 段承刚 (泸州医学院基础医学院分子生物学实验室 ，四JlI泸州646oo0) [摘 要] 目的：从蛋 白质可逆磷酸化修饰 的角度初步勾勒出CCK 型受体介导的胞 内信号转导途径。 方法：培养的小鼠大脑皮质神经元分为实验组、对照组和受体拮抗剂组，在无磷培养基加入 P]一NaH：PO 标记 细胞中的磷蛋白后，刺激组给予 CCK。(10一moL／L)，对照组加入等量的无磷培养基，受体拮抗剂组在分别加入 CCK^型、CCKB型受体拮抗剂L364718、L365260以及L364718+L365260，浓度均为 10一moL／L，孵育 10min后 ， 再加入 10～moL／LCCK ，37oC作用60min，液氮中终止磷酸化反应。裂解细胞提取蛋白质，双向电泳分离，放射 自 显影7d后 ，获得磷酸化蛋 白的放射 自显影双向电泳图谱。采用PDQuest2D分析软件对图谱进行差异分析，并在 Swiss—Prot蛋白质数据库和 自建磷蛋白数据库中查询定性。结果：CCK。作用60min后，小鼠神经元 CCK。信号转 导相关磷酸化蛋白有：多种蛋白激酶、细胞信号分子、生长因子受体、转录因子等。加入、L364718后，神经元中 PKCB、P55G等的磷酸化水平降低 ，加入L365260后．PKCct、PKG31、OGFR、EGFR等的磷酸化水平呈现不同程度的 降低 ，表明皮质神经元中CCK 受体介导的信号转导 复杂。结论：CCK 型、GGK 型受体均可介导CCK。在神经 元的信号转导，但CCK 型受体可能发挥了更重要的作用，其介导的信号途径可能包括：肌醇磷脂信使系统、cAMP — PKA途径 、MAPK途径、JNK途径、PI3K—PKB途径和 cGMP—PKG途径。 [关键词] 胆囊收缩素 ；神经元；信号转导 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Proteinphosphorylation inducedbyCCKB—receptorinmouseneurons HETao，LIJuan，WANGLi，GAN Lin，SONGJie，DUAN Cheng—gang (LaboratoryofMolecularBiology，LuzhouMedicalColelge，Luzhou646OOO，China．E—mail：HeTao198@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Toexploretheintracellularsignalingtransductionpathwaysinmouseneuronsstimulatedby octapoptidecholecystokinin(CCl(8)onhtebaseofphosphoproteomeanalysisnadtoevaluatethetyposofreceptorbythe useofCCl(8receptorspecificnatagonists．METHODS：CulturedneuronsweredividedintoCCKstimulationgroup，CCK receptornatagonistgroupandcontrolgroupatrandom．Allofthemwerelabeledwiht P]orthophosphate(2．03×10 Bq／L)for2hin5％ CO2at37oC．Controlandstimulationgroupswerestimulatedw