HMGN2分子体外抗乙型肝炎病毒活性研究.pdfVIP

· 1606 · ChineseJournalofPathophysiology 2009。25(8)：1606—1611 [文章编号】 1000-4718(2009)08—1606—06 HMGN2分子体外抗乙型肝炎病毒活性研究木 孔祥丽 ， 张 平 ， 何 芳 ， 张 敏 ， 唐 红 ， 冯 云 ， 吴 琦 ， 黄 宁 ， 王伯瑶 (四川大学 口腔疾病研究国家重点实验室 ，华西医院感染性疾病中心， 华西基础医学与法医学院感染免疫研究室 ，四川成都610041) [摘 要】 目的：我们先前的研究证明HMGN2(hJghmobilitygroupnucleosomal—bindingdomain2)是人LAK 细胞抗菌的一个新的效应分子，本研究欲检测其体外抗乙型肝炎病毒的活性。方法：应用反向高效液相色谱技术 从人淋巴结组织酸溶性提取物中分离纯化批量HMGN2分子，用质谱精确分子量测定、Westernblotting和抗菌试验 对分离纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。采用MTT法检测 HMGN2分子对稳定转染复制型HBV重组质粒 的肝胚瘤细胞株HepG2．2．15细胞的细胞毒性；用不同浓度 HMGN2分子作用于 HepG2．2．15细胞 ，分别在第3d 和第6d收集细胞培养上清液，ELISA检测上清中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)，采用实时荧光定 量PcR法检测上清液HBVDNA的含量。结果：从人淋巴结组织中分离纯化获得纯度较高的HMGN2蛋白；在 检 1一100ms／L范围内，HMGN2分子对HepG2．2．15细胞无细胞毒性；HMGN2分子在 1—5ms／L水平即可显著 抑制HBeAg和HBsAg的表达，可显著降低 HBVDNA拷贝数。结论：HMGN2分子在体外具有较强的抗 HBV 活性。 【关键词】 HMGN2；抗病毒活性；肝炎病毒，乙型 【中圈分类号] Q786 [文献标识码] A Inhibitoryeffect0fHMGN2proteinonhumanhepatitisB viralHBeAg and HBsAg expression and DNA replication in HBV ——transformed HepG2．2．15cellline KONGXiang—li，ZHANGPing ，HEFang ，ZHANGMin ，TANGHong2 FENGYun ， ， WUQi，HUANGNing，WANGBo—yao (。StateKeyLaboratoryofOralDiseases，CenterofInfectiousDiseases，WestChinaHospital，ResearchUnitofInfectoinand Immunity，WesthCinaSchoolofPreclinicalandForensicMedicine，SichuanUniversity，C~ngdu610041，China．E— mail：fengyunxixi@yahoo．tom．cn) [ABSTRACT] AIM：WepreviouslydemonstratedthatHMGN2isanantibacterialeffcetormoleculeinhumanLAK cells．ThisstudywastoexaminetheantiviralactivityofHMGN2againsthumanhepatitisvirus．METHODS：Thepurifica- tionnadidentifyofHMGN2proteinsincludingpreparativeacid—ureapolyacymidegelelectrophoresiselution。revert~一 phasehish—performanceliquidchromatography，massspecturm，We