siRNA—survivin与GRIM-19共表达质粒的构建及其对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(7)：1241—1246 · l241 · [文章编号] 1000-4718(2012)07—1241—06 siRNA—survivin与 GRIM 一19共表达质粒的构建及 其对前列腺癌 DU145细胞生长的抑制作用珠 沈维高 ， 赵丽晶 ， 盖晓东 ，芦丽莉 ， 葛 贺 ， 陈立松 ， 刘艳波 ， 赵雪俭 △ (北华大学基础医学院病理生理学教研室，吉林 吉林 132013；。吉林大学前列腺疾病防治研究中心，吉林 长春 130021) [摘 要] 目的：构建 siRNA—survivin与 GRIM一19共表达质粒 pGRIM一19一si—survivin并鉴定，观察 pGRIM一19一si—survivin质粒对人前列腺癌DU145细胞survivin和GRIM一19mRNA表达水平及细胞增殖能力的 影响。方法：根据前期工作，利用基因重组技术构建 siRNA—survivin与GRIM一19共表达质粒，将成功构建的 pGRIM—l9一si—survivin质粒转染人前列腺癌 DU145细胞株 ，应用半定量 RT—PCR方法检测细胞 内survivin和 GRIM一19mRNA表达水平，应用MTF法观察其对细胞增殖能力的影响。结果 ：(1)应用酶切及质粒测序法鉴定， 证明成功构建siRNA—survivin与GRIM一19共表达质粒。(2)与mock组 比较，psi—survivin、pGRIM一19及 pGRIM … 19 si survivin组 survivinmRNA表达水平分别为 0．554-0．05、0．62-40．08和0．35-40．05，差异显著(P 0．01)；与psi—survivin和pGRIM一19组 比较 ，pGRIM一19一si—survivin的抑制survivin表达作用明显增强(P O．05)；psi—survivin、pGRIM一19和pGRIM一19一si—survivin组 GRIM一19表达增强，分别为mock组的 1．93-4 0．14、2．57-40．20和4．12-40．21(P0．O1)，与pGRIM一19组比较，pGRIM一19一si—survivin增强GRIM一19表达 作用更明显 (P0．05)。(3)转染48h后，与mock组比较， 一survivin、pGRIM一19和pGRIM…19 si survivin3 组细胞增殖率分别为58．0％-47．2％、62．1％4-6．1％和50．2％-44．8％，差异显著(P0．05)；转染72h后 ，与mock 组比较 ，3组细胞增殖率分别为43．4％-44．3％、51．3％-46．7％和26．8％-47．1％，差异明显 (P0．05，P0．01)； 与psi—survivin和pGRIM一19组比较，pGRIM一19一si—survivin抑制作用明显增强 (P0．05)。结论：成功构建 siRNA—survivin和GRIM一19共表达质粒pGRIM…19 si survivin；该质粒抑制 survivin表达并增强GRIM一19表 达，对前列腺癌DU145细胞具有协同增殖抑制效应。 ． [关键词] 前列腺肿瘤；存活蛋白；GRIM一19 [中图分类号] R737．25 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．07．017 ConstructiOn ofsiRNA —survivin andGRIM 一19 coexpression plasmid and itsgrowthinhibitoryeffectonprostaticcna cerDU145cells SHENWei—gao，ZHAOLi—jing2，G IXiao—dong，LULi—li，GEHe，CHENLi song 。LIUYan—bo ．ZHAOXue—iian (DepartmentofPat~phrsoitosy，SchoolofBasicMedcialCollege，Beihu