siRNA沉默MIF基因抑制大细胞肺癌H460细胞增殖.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(5)：853—858 · 853 · [文章编号] 1000—4718(2011)05—0853—06 siRNA沉默MIF基因抑制大细胞肺癌 H460细胞增殖 侯俊娜 ， 罗益锋 ， 王杜娟 ，杨惠玲 ， 郭禹标 (中山大学 ’附属第一医院呼吸内科，中山医学院病理生理学教研室，广东 广州510080) [摘 要] 目的：研究小干扰 RNA(siRNA)阻断巨噬细胞抑制因子(MIF)基因表达对大细胞肺癌细胞株 H460细胞增殖的抑制效应并探讨其抑瘤机制。方法：在体外培养的H460细胞中，采用免疫荧光法观测 siRNA转 染效率，Westernblotting检测MIF蛋白的表达，MTr法和平板克隆形成实验检测 MIFsiRNA对 H460细胞活性和增 殖的抑制作用，Hocchst染色出现后荧光显微镜观测转染后细胞的形态学变化 ，流式细胞仪观测细胞凋亡。结果： 与阴性对照组相比，siRNA能有效阻断MIF蛋白的表达 ，显著抑制 H460细胞活性及增殖能力(P0．05)；Hoechst 染色可见转染MIFsiRNA后的H460细胞出现典型的凋亡形态学改变；流式细胞术结果显示转染 MIFsiRNA1和 MIFsiRNA2后细胞凋亡较阴性对照组显著增加 [(18．09±0．41)％ 和(23．38±2．67)％ (5．87±1．05)％，P 0．05]。结论：MIF在大细胞肺癌的发生发展过程中发挥着重要作用，siRNA阻断MIF蛋白表达，可抑制H460细胞 增殖，提示其极有可能成为肺癌的新治疗靶点。 [关键词] 巨噬细胞抑制因子；小干扰 RNA；肺肿瘤 [中图分类号] R734．2 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．05．005 Inhibitionofhuman lungcarcinomaH460cellproliferation by siRNA —— mediatedMIFknockdown HOUJun—na，LUOYi—feng，WANGDu—juan，YANGHui—ling，GUOYu— biao (DepartmentofPulmonaryandCriticalCareMedciine， eFirstAffiliatedHospital，DepartmentofPathophysiology， ZhongshanSchoolofMedciine，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China．E—mail：guoyubiao@hotmail．con) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheinhibitoryeffectofsiRNA—mediatedMIFknockdownontheproliferation ofhumanlungcarcinomaH460cellsandtoelucidatethemolecularmechanism ofanti—tumoreffectofthesiRNA．METIt- ODS：Thetrnasfectionefficiencywasassessedbyimmunofluorescencetechnique．TheexpressionofMIFafterthegene knockdownwasdeterminedbyWesternblotting．Th eviabilityandproliferationofH460 cancercellsweredetectedbyMTY assayna dcolonyformationassay，respectively．Thecellapoptosisandmorphologicalchangeswereexaminedbyflow cytom— etryandelectronmicroscopy，respectively．RESULTS：MIFsiRNA significna tlyinhibitedMIF expressio