siRNA沉默转酮醇酶样基因1下调人宫颈癌细胞HIF-α表达及糖酵解关键酶活性.pdfVIP

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中国病理生理

· 72 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014,30(1):72-76 [文章编号] 1000-4718(2014)O1—0072-05 siRNA沉默转酮醇酶样基因1下调人宫颈癌细胞 HIF-10表【达及糖酵解关键酶活性 张德太 , 左曙蓉, 杨 文, 石伍和, 涂启明, 梁 涛, 张 科 (华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科,湖北 武汉 430022) [摘 要] 目的:通过siRNA技术沉默宫颈癌细胞转酮醇酶样基因.1(TKTL1)后观察其在缺氧条件下低氧诱 导因子 1(HIF一1ot)表达水平及糖酵解途径中2个关键酶己糖激酶 Ⅱ(HK.II)和乳酸脱氢酶 (LDH)活性的变化情 况 ,旨在探讨肿瘤细胞 TKTL1表达与糖酵解途径的关系。方法:用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转 染HeLa细胞株 ,RT-PCR检测TKTL1mRNA表达并结合转酮醇酶(TKT)活性测定判断其干扰效率;以未转染HeLa 细胞为对照,进一步观察 TKTL1沉默的癌细胞在缺氧条件下HIF-lot和HK.Ⅱ表达水平 ,以及HK—II和LDH活性的 变化。结果:siRNA沉默HeLa细胞 TKTL1基因后TKTL1mRNA表达下降,TKT活性显著降低(P0.01),HIF-lot 和HK.Ⅱ表达水平及HK—II和LDH活性较对照组细胞均显著降低 (P0.01)。结论:沉默肿瘤细胞TKTL1基因能 下调HIF。1表达并降低糖酵解代谢关键酶活性 ,从而影响肿瘤细胞的恶性表型。 [关键词】 转酮醇酶样基因1;低氧诱导因子 10【;糖酵解 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2014.O1.012 SilencingofTKTL1genebysiRNA down--regulatesHIF--laexpressionand activityofglycolytickeyenzymesinhumancervicalcancercells ZHANGDe—tai,ZUOShu-rong,YANGWen,SHIWu-he,TUQi-ming,LIANGTao, ZHANG Ke (DepartmentofLaboratoryDiagnosis,UnionHospital,TongiiMedicalCollege,Huazhong ofScienceTechnolo— gY,Wuhan430022,China.E-mail:Detaizhangwh@163.con) [ABSTRACT] AIM:Toexploretherelationshipbetweentheexpressionoftransketolase-likegene1(TKTL1) andglycolysismetabolisminhumancervicalcens.METHODS:Thechangesofhypoxia—induciblefactorlot(HIF—lot) expressionandtheactivityofglycolytickeyenzymes,hexokinaseII(HK—H)andlactatedehydrogenase(LDH),under hypoxiainhumancervicalcelllineHeLawereobservedafterTKTL1wasknockdownbysiRNA.ThespecificsiRNA expres- sionvectortargetingTKTL1genewasconstructed,nadtherecombinantplasmidwastransfectedintoHeLacells.Th eeffects ofTKTL1silencingwereevaluatedbydetectingtransketotase(TKT)activitynadTKTL1mRNAexpressionusingRT-PCR. ThechangesofHIF-10【expressionnadH

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