siRNA抑制外源绿色荧光蛋白在neuro-2a细胞株中的表达.pdfVIP

维普资讯 生理杂志 chin 』o1 !巳z Z：丝(墨2；! != 丝 · 1531 · [文章编号] 1000-4718(2007)08—1531—04 siRNA抑制外源绿色荧光蛋白在 neuro一2a细胞株 中的表达 张小勤 ，‘ 李 峰 ， 赵 艳 ， 彭映基 ，‘ 潘玉春 ， 孟 和 ， 崔芳岩 (。中山大学基础医学院解剖学教研室，广东 广州510080；上海交通大学农业与生物学院，上海 200240) [摘 要] 目的：用RNAi技术抑制哺乳动物神经元中外源报告基因的表达 ，并探讨该过程中RNAi的时间 及剂量效应 ，为利用 RNAi技术研究神经元基因功能提供参考。方法 ：采用神经细胞来源的细胞系neuro一2a小鼠 神经瘤细胞为模型，将外源绿色荧光蛋白(GFP)基因转染到 neuro一2a细胞内，利用体外转录法合成 siRNA，分为3 个剂量组对其进行干扰。结果：Neuro一2a细胞可以被有效地转染，而且 siRNA在 neuro一2a细胞 内可以有效发挥 干扰作用。这种干扰作用呈现出一定的剂量效应。结论：RNAi技术可以成功用于neuro一2a细胞抑制基因的表 达，这种对GFP表达规律及RNAi剂量效应的研究为利用 RNAi技术研究神经元基因功能提供了一定的理论参考和 依据。 [关键词] RNA干扰；绿色荧光蛋白；神经元 [中图分类号】 R363 [文献标识码】 A siRNAsinterferenceexogenousGFP geneexpression inneuro——2acells ZHANGXiao—qin ，LIFeng，ZHAO~an，PENG~ing—ji，PANYu—chun，MENG He ．CUIFang—yan (InstituteofBrainResearch，BasicMedicalCollege，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080；SchoolofAgriculture andBiology，ShanghaiJiaoTong Uaivers ，Shanghai200240，China．E—mail：Ufeng@gzsums．edu．ca) [ABSTRACT] AIM ：ToassesstheeffectofRNAionsuppressingtheexogenousreportergeneexpressioninmain- malianneurons。andexploretheeffectofsiRNAquna titationoninterferenceefficiency．METHODS：Exogenousgreenflu- orescentprotein(GFP)expressionvectorWaStrnasferredintoneuro一2acells，nadthenthesmallinterferenceRNAtarge- tingGFPmRNA(siGFP)synthesizedbytrnascriptioninvtiroatthreedifferentconcentrationWaS usedinhtisexperiment． RESULTS：Theresultsshowedthattheneuro 一2acellsCna betransfectedefficientlynadsiGFPCna inhibitGFPexpres- siongreatly．CONCLUSION ：RNAiCna be appliedintomammalianneuronssuccessfully．Th eresearchonsiRNAquanti- tationwillprovidetechniquesupportforstudyingthegenefunctionofneuronsinthefuture． [KEYWORDS] RNAinterference；Greenflulorescentprotein；Neurons 在早期的转基因实验中，人们试图通过增加某 表达的阻断作用为 RNA干扰 (RNAinterference， 个功能基因的