SMYD3过表达对人肝内胆管癌细胞miR-124表达及细胞增殖的影响.pdfVIP

· 76 · 生国 理生理苤 ChineseJournalofPathophysiology 2012，29(1)：7680 【文章编号] 1000-4718(2013)01-0076-05 SMYD3过表达对人肝 内胆管癌细胞 miR．124表达 及细胞增殖的影响 郑礼平 ， 李志花 ， 陈汝福 ， 曾 兵 ， 周嘉嘉 ， 龚远锋 ， 宋亚东 (中山大学孙逸仙纪念医院 肿瘤科 ，肝胆外科，广东 广州510120) [摘 要】 目的：探讨肝内胆管癌细胞 HCCC-9810中SET和 MYND结构域含有蛋白3(SETandMYNDdo main·containingprotein3，SMYD3)过表达对miR-124表达及细胞增殖能力的影响。方法：瞬时转染 SMYD3真核表 达质粒后，Westernblotting检测细胞中SMYD3蛋白水平的变化；qRT—PCR检测细胞中SMYD3mRNA和 miR．124 表达；甲基化特异性PCR检测miR一124一』、miR一124—2和miR一124—3基因启动子甲基化水平；CCK8和平板克隆形成 实验检测细胞增殖能力。结果：以空白组为对照，肝 内胆管癌细胞 HCCC-9810在转染 pEGFP—SMYD3质粒后， SMYD3蛋白及mRNA表达均显著上升(P0．05)，miR一124一miR．124-2和miR一124-3基因启动子甲基化显著增加 (P0．05)，miR一124表达明显下降(P0．05)，细胞增殖能力显著提高(P0．05)。结论：过表达 SMYD3可引起 miR-124基因启动子甲基化增加，导致胆管癌细胞中miR一124的表达下降，同时过表达SMYD3可增强细胞增殖能 力。 [关键词] HCCC-9810细胞；SET和MYND结构域含有蛋白3；miR．124；甲基化特异性PCR；细胞增殖 [中图分类号] R735．8 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2013．01．012 EffectofSMYD3 over—expression on miR一124expression andprolifera- tionabilityinhumanintrahepaticcholangiocarcinomacells ZHENG Li—ping ，LIZhi—hua ，CHENRu—fu。， ZENGBing，ZHOUJia-jia，GONGYuan— feng ，SONGYa—dong (DepartmentofOncology，DepartmentofHepatobiliarySurgery，SunYat—senMemorialHospital，SunYat—senUniversity， Guangzhou510120，China．E-mail：lzhzsdxsyx@126．corn) [ABSTRACT]AIM：ToexploretheeffectofSETandMYNDdomain—containingprotein3(SMYD3)over—expres— siononmiR一124expressionandproliferationabilityofhumanintrahepatiecholangiocarcinomacells．METHODS：Trna si— enttransfectionofSMYD3eukaryotieexpressionplasmidintohumanintrahepaticeholangiocarcinomacelllineHCCC-9810 wereperformed．TheexpressionofSMYD3atmRNA andproteinlevelswasmeasuredbyqRT—PCR andWesternblotting， respectively．TheexpressionofmiR一124wasdetectedbyqRT—PCR，andthemethylationstatusofmiR一124genewasdeter-