Xaf1调节TNFR信号转导而诱导细胞凋亡的机制研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiolo o7垫 (!)； !二 · l347 · [文章编号] 1000—4718(2007)07—1347—05 Xafl调节 TNFR信号转导而诱导 细胞凋亡的机制研究 夏 焱， 檀卫平 ， 梁立阳， 苏浩彬， 郭海霞， 方建培， 黄绍良 (中山大学附属第二医院儿科，广东 广州510120) [摘 要] 目的：利用基因开关调节的Xafl—Saos诱导细胞株 ，检测Xafl对TNFR信号转导通路的影响，探 索Xafl与TNF—a协同诱导细胞凋亡的机制。方法：以免疫印迹法和RT—PCR检测Xafl对TNFR1表达的影响， 细胞周期 DNA含量流式细胞术检测NF—KB对Xafl诱导细胞凋亡的影响，gelmobilityshiftassay检测 NF—KB的 DNA结合活性，luciferase活性检测法及 RT—PCR检测NF—KB的转录活性，激酶分析法检测SAPK／JNK激酶的活 性。结果：Xafl不影响TNFR1蛋白及mRNA水平的表达 ，细胞内诱导活性的NF—KB可抑制Xafl诱导的细胞凋 亡，Xafl的表达抑制TNF—a所介导的NF—KB的DNA结合活性和转录活性，也抑制了SAPK／JNK激酶的活性。 结论：Xafl对TNFR信号转导的抑制是Xafl协同TNF—a诱导细胞凋亡的机制之一。 [关键词] Xafl；细胞凋亡；受体，肿瘤坏死因子；信号转导 [中图分类号] R730．3 [文献标识码] A XaflregulatesTNFR signalpathwayandinducesapoptosis XIA Yan，TAN Wei—ping，LIANG Li—yang，SU Hao—bin，GUOHai—xia，FANGJian — pei．HUANG Shao—liang (DepartmentofPediatrics，TheSecondAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510120，China．E—mail： kellyxia2005@gmail．con) [ABSTRACT] AIM ：Xafl—Saosinduciblecelllines，whichcontain “geneswitch”systemwereusedtodetect theeffectofXaflontumornecrosisfactorreceptor(TNFR)signalpathwayandtoinvestigatethemechanismofcooperation betweenXaflandTNF—a in inducingcellapoptosis．METHODS：XaflOilTNFR1expressionwasmeasured byRT— PCR andWesternblotting．TheeffectofNF—KBonXaflinducedapoptosisWas detectedbyDNA contentflow cytometry afterCO—transfection．DNA bindingactivityofNF—KBWas identifiedbygelmobilityshiftassayandtranscriptionactivity ofNF—KBWas analyzedbyluciferaseassayandRT—PCR．SAPK／JNK activityWas checkedbySAPK／JNK assay．RE． SULTS：XafldidnotmodulateTNFR1atproteinandmRNA levels．IncreasedNF—KBactivitvince11sinhibitedXaflin— ducedapoptosis．Expression