星形胶质细胞条件培养液促进胚胎干细胞分化为神经元样细胞的实验研究.pdfVIP

维普资讯 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2006,22(12)：2407-2410 [文章编号】 1000—47l8(2006)12—2407—04 星形胶质细胞条件培养液促进胚胎干细胞分化为 神经元样细胞的实验研究木 周玉峰 ， 方 峰 ， 付劲蓉， 李 革， 董永绥 (华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科 ，湖北 武汉 430030) [摘 要】 目的：探讨星形胶质细胞条件培养液在体外能否促进胚胎干细胞 (ESCs)向神经元方向分化。方 法：在Bain等建立的4一／4+方案基础上，分成两组 ：单用ATRA组和ATRA联合胎脑星形胶质细胞条件培养液 组，分3阶段诱导ESCs定向生成神经元样细胞。形态学观察及畸胎瘤形成试验对ESCs的全能性进行鉴定；免疫 组化染色法检测 nestin、GFAP、NSE和NF一200的表达对诱导过程进行动态监测。结果：(1)体外培养的小鼠ESC — D3细胞在胚胎成纤维饲养层细胞上连续传代培养，仍保持向3胚层分化的能力。(2)在诱导分化阶段，联合诱 导组分化细胞NF一200和NSE的表达阳性率高于单用ATRA组。(3)联合诱导组最终诱导ESCs生成纯度高达 73．5％神经元样细胞。结论：采用胚胎脑星形胶质细胞条件培养液可较高产率及纯度地促进ESCs生成神经元样 细胞，值得推广应用。 [关键词】 胚胎干细胞；神经元 ；星形细胞 [中图分类号】 R363 [文献标识码】 A Efficientproduction ofneuron——likecellsfrom embryonicstem cellsin． ducedbyastrocyte——conditionedmedium ／n vitro ZHOU Yu—feng，FANG Feng，FU Jin—rong，LIGe，DONG Yong—sui (DepartmentofPediatrics，ronviHospital，ton# MedicalCollege，HuazhongUniverstiyofScienceandTechnology．Wu- han430030，China．E—mail：fla．．g@珈．qmu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatewhetherefficientproductionofneuron—likecellsfromembryonicstemcells (ESCs)Callbeinduedbyastrocyte—conditionedmedium (ACM)invtiro．METHODS：Basedonthe4一／4 protocol establishedbyBain，twogroupswerestudied：ATRA group，ATRA withACM group．ESCswereinducedintoneuron— likecellsbymeansofthree—step differentiation vitro．ThetotipotencyofESCswasidentified bvtheobservationof cells’morphologyandtheformationsofteratomainimmunocomprisedmice．ThecelldifferentiationWas evaluatedcontinu． ouslybydetectionofthecellularspecificmrakersofneural stem cell，neuronsnadastrocytessuchas nestin，NF一200 ．