一种骨桥蛋白小分子肽的原核表达与生物学活性鉴定.pdfVIP

· 848 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(5)：848—852 [文章编号】 1000-4718(2009)05-0848-05 一 种骨桥蛋 白小分子肽的原核表达与 生物学活性鉴定 术 刘颖慧， 田文嘉， 郑 斌， 韩 梅， 温进坤 (河北医科大学生物化学与分子生物学研究室，河北 石家庄 050017) [摘 要】 目的：用大肠杆菌(Ecoli)表达骨桥蛋白l3肽(OPN13)，经亲和层析纯化后检测其生物学活性。 方法：运用基因重组技术 ，将骨桥蛋白分子中含黏附序列的l3肽 eDNA片段与携带His编码序列的原核表达载体 连接构建融合蛋白表达质粒pET一32e—OPN13。将重组质粒转化EcoliDH5cx宿主菌后 ，对诱导融合蛋白表达的 条件进行优化。表达产物His—OPN13经Ni—NTAHisBindResin金属离子螯合层析纯化后，分别检测其对骨桥蛋 白诱导的血管平滑肌细胞黏附和迁移的影响。结果：所表达的His—OPN13融合蛋白在宿主菌中以胞浆可溶性的 形式存在。经亲和层析可得到高纯度的His—OPN13融合蛋白。产物活性分析表明，His—OPN13融合蛋白能特异 性地抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞的黏附和迁移。结论：OPN13肽可在大肠杆菌中高效表达，并可剂量依 赖性地抑制血管平滑肌细胞黏附和迁移活性。 [关键词] 骨桥蛋白；OPN13肽；原核表达；生物学活性 [中图分类号] Q78 [文献标识码] A Prokaryoticexpressionandidentificationofasmallpeptideofosteopontin LIUYing—hui，TIANWen—jia，ZHENGBin，HANMei，WENJin—kun (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，InstituteofBasicMedciine，HebeiMedcialUniversity，Shijiazhuang 050017，China．E—mail：wjk@hebmu．edu．Cl1) [ABSTRACT] AIM：Toexpressosteopontin13peptide(OPN13)inE．coli，andtotestthebiologicalactivityof thepurifiedproducts．METHODS：cDNA fragmentscontainingRGD sequenceswereclonedintoprokaryotieexpression vectorpET一32c(+)includingHiscodingsequencetoconstructpET一32c—OPN13plasmid．E coliDH5cttransformed bypET-—32c——OPN 13plasmidwasinducedbyIPTG atdifferentconcentrationsfordifferenttimestoidentifytheoptimal inductioncondition．ExpressedHis—OPN 13fusionproteinwaspurifiedviaNi—NTA HisBindResin metalchelation chromatography，anddetectedbyVSMCsadhesionandmigrationanalysis．RESULTS：His—OPN 13fusionproteinwas expressedinsolublemanner．ThefusionproteinswerepurifiedviaNi—NTA HisBindResinaffinitychromatography．His — - OPN 13fusionproteinspecificallyinhibitedadhesionandmirgationofVSMCsstimulatedbyosteopontinindose——de— pendentmann