体外LPS刺激及CD40的配基化对sCD40基因修饰DCs+TLR4-MD2表达及IL-12分泌的影响.pdfVIP

维普资讯 · 2470· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(12)：2470—2473 【文章编号] 1000-4718(2007)12—2470—04 体外 LPS刺激及 CIM0的配基化对 sCD40基 因 修饰 DCsTLR4一MD2表达及 IL一12分泌的影响 贺杰峰 ， 赵浩亮 ， 马晓军 ， 董胜利 ， 张 悦 ， 冯 炜 (华中科技大学同济医学院 附属同济医院普外科，附属同济医院感染科 ， 免疫学系，湖北 武汉 430030；山西医科大学第一医院，山西 太原030001) 【摘 要] 目的：研究体外LPS刺激及CD40的配基化对可溶性 CIM0(sCD40)基因修饰树突状细胞TLR4一 MD2表达及IL一12分泌的影响，为有效利用树突状细胞诱导特异性移植免疫耐受提供实验依据。方法：脂质体法 将质粒pEGFP—N1／sCD40及空质粒pEGFP—N1转染DC2．4细胞株；应用LPS及抗CD40单抗刺激6h，流式细胞 仪检测DC表面TLR4一MD2的表达，RT—PCR法检测 DC的TLR4mRNA表达水平，并用ELISA法检测细胞因子 IL一12p70的分泌。结果：LPS刺激下调DC表面TLR4一MD2的表达，同时给予CD40配基化可引起TLR4一MD2 的表达显著增高；CD40配基化对DCTLR4mRNA水平表达无影响，但可部分地增高LPS引起的TLR4mRNA表达降 低；此外 ，CD40的配基化可显著诱导LPS刺激后 IL一12分泌增加。sCD40基因修饰DC可拮抗以上作用。结论： 体外LPS及抗 CD40单抗刺激下，sCD40基因修饰树突状细胞可显著下调其表面 11LR4一MD2的表达，IL一12p70 分泌减少，可能与阻断胞浆内的TLR4一MD2的转运过程有关。 【关键词] CD40；树突细胞 ；受体，Toll样；白细胞介素 12 [中图分类号】 R363 [文献标识码】 A InfluenceofstimulationbyLPSandCD40ligandizationinvitroon the TLR4——MD2 expression and IL ——12 production in DCsmodified by sCD40gene HEJie—feng‘，ZHAOHao—liang，MAXiao—jun，DONGSheng—li‘，ZHANGYue， FENG Wei (。DepartmentofGeneralSurgery，DepartmentofInfection，DepartmentofImmunology，ton#MedicalCollege，Huazhong UniversityofScienceandTecholoyg，Wuhan430030，China； Firstaffili~dHospita1．ShanxiMedcialUniversity， Taiyuan030001，China ．E —mail：he一 ． hotmail．corn) [ABSTRACT] AIM：TostudytheinfluenceofstimulationbyLPSandCD40ligandizationinvitroontheTLR4一 MD2expressionandIL一12productionindendriticcells(DCs)modifiedbysCD40geneandprovidetheexperimental cluesofinducingdornor—specificimmunetolerance．M ETHODS：PlasmidpEGFP—N1／sCIMOnadpEGFP—N1wastrnas- fectedintoDC2．4celllinewithlipofectamine．After6h oft