天然脑活素定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究.pdfVIP

· 1548· 中国病理牛理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(8)．1．墨= [文章编号】 1000-4718(2009)08—1548—06 天然脑活素定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞 向 神经元样细胞分化的实验研究 李映红 ， 吴正治 ， 吴伟康 ， 李 明 ， 王济国 ，杨 敏 ， 陈蔓茵 (中山大学中山医学院，广东 广州510080；南方医科大学附属深圳医院，广东 深圳518035) [摘 要】 目的：探讨天然脑活素(NC)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法： 取6—8周龄sD大鼠，无菌获取胫骨和股骨骨髓，全骨髓贴壁筛选法分离培养并纯化大鼠MSCs，应用天然脑活素 诱导MSCs向神经元分化。倒置相差显微镜追踪比较观察分化过程中细胞形态的变化，免疫细胞化学和逆转录一 聚合酶链反应 (RT—PCR)方法检测神经元特异性标志物：巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤 维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。免疫细胞化学检测细胞微管相关蛋白一2(MAP一2)的表达。结果：经全骨髓贴 壁筛选法获得了纯度较高(90％以上)的大鼠MSCs，天然脑活素含药血清诱导分化后的细胞呈现双极、多极和锥形 的典型神经元细胞的形态，分别从mRNA和蛋白水平上证实诱导分化后的细胞表达神经元标记物NSE和nestin， 不表达神经胶质细胞标记物GFAP。诱导分化后细胞MAP一2的表达明显。结论：天然脑活素可诱导 MSCs向神经 元样细胞的定向分化。 【关键词】 天然脑活素；骨髓间充质干细胞；神经元样细胞 【中图分类号] R749．1 [文献标识码] A Ratmesenchymalstem cellsoriented differentiation into neuron —like cellsinducedbynaturalcerebrolysin LIYing—hong ，WU Zheng—zhi，WU Wei—kang ，LIMing2 WANG ji—guo ， ， YANG Min ．CHEN Man—yin (ZhongshanSchoolofMedicine，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China；ShenzhenHospital，SouthernMed- cialUniverstiy，Shenzhen518035，China．E—mail：yinghongli@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Naturalcerebrolysin(NC)isaChinesetraditionalmedicine，formulatedbytallgastrodistu- ber．ginsengandginkgoleafat2：1：2qualityratio．ThisstudyistoinvestigatewhetherNC caninduceratmesenehymal stemcells(MSCs)todifferentiateintoneuron—likecellsinvitro．METHODS：TheSDratsabout6—8weekoldWere usedforexperiment．MSCswereseparatedfrom shinboneand／orthighbonemalTow ofratsbyholo— marrow andwall stickingmethods．MSCspassageswereculturedanddepuratedinvitro．ThepurifiedMSCswereinducedtodifferentiateori— entedlyintoneuron—likecellsbyincubatingthecellswithNC．Th emorphologyofcellswasobservde u