人肝再生增强因子在体外可与Na%5e＋-K%5e＋-ATPase特异性结合.pdfVIP

维普资讯 · 734 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(4)：734—736 [文章编号] 1000—4718(2008)04一o734-03 人肝再生增强因子在体外可与 Na+一K+一ATPase特异性结合 佟明华 ， 孔祥平 ， 李 脉 ， 杨联萍 ， 杨汝德 (’解放军第458医院全军肝病中心，广东 广州510600；华南理工大学生物工程系，广东 广州510641) [摘 要] 目的：用体外下拉实验证明人肝再生增强因子(hALR)与其相互作用蛋白Na 一K 一ATPase的 体外结合作用。方法：将Na 一K 一ATPaseB亚基部分基因片段定向克隆到pGEX一4T一1中，转化大肠杆菌 DH5a，IPTG诱导，获得 Na 一K 一ATPaseB亚基部分蛋白与谷胱甘肽(GST)的融合表达，经 GST偶联的琼脂糖 珠纯化，以GST下拉实验检测其与hALR蛋白的体外直接相互作用。结果：还原型SDS—PAGE显示GST—Na 一 K 一ATPase融合蛋白泳道有 hALR蛋白单体和二聚体条带，Westernblotting结果进一步证实为hALR蛋白。结 论：Na 一K 一ATPase可在体外与hALR蛋白特异地结合。 [关键词] 肝再生增强因子；Na 一K 一ATPase [中图分类号] R363 [文献标识码] A Interaction between human augmenterofliver regeneration andNa 一 K 一ATPase ／n vitro TONG Ming—hua ，KONG Xiang—ping ，LIMai，YANG Lian—ping ，YANG Ru— de2 (CenterofLiverDiseasesofPLA，The458thHospitalofPLA，Guangzhou510602，China；DepartmentofBiotechnology， SouthChina UniversityofTechnology，Guangzhou510641，China．E—mail：minghuat@tom．corn) 【ABSTRACT] AIM：TocheckthephysicalinteractionBetweenGST—Na 一K 一ATPasedomainandrecombi- nanthumanaugmenterofliverregeneration(rhALR)byGSTpulldownassay．METHODS：WithPCRandgeneticre— combinnattcehniques，htecodingregionofBsubunitofNa 一K 一ATPaseWas clonedintoexpressingplasmidpGEX一 4Tandidentifiedbyendonucleasedigestionandsequencingmehtod s．Undertheinducingof0．1mmoVLIPTG，htefusion proteinGST— Na 一K 一ATPasedomainWas highlyexpressedbyE coliDH 一5a．Afterhypersoundquassating．the GST— Na 一K 一ATPasedomainWas purifiedbyglutathioneagarosebeadsandthephysical interactionwiht rhALRw鹊 checkedbyGSTpulldown assay．RESULTS：AnalysisbySDS—PAGE showedhterhALRsofmonomernaddimmerin GST— Na 一K 一ATPasedomainlane．TheWesternblottingofhteGST—pulldown assayshowedhtesalnere8ultsa8 wel1．CONCLUSION ：Th eNa 一K 一ATPasedomainisassociatedwiht rhALRspecificallyin