通过富集母血浆中胎儿游离DNA无创性产前诊断β地中海贫血.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(10)：1861．1867 · 1861 · [文章编号] 1000．4718(2014)10—1861—07 通过富集母血浆中胎儿游离 DNA 无创性产前诊断 13地 中海贫血水 王青青， 张 媛， 章 钧， 郝秀兰，侯红瑛 (中山大学附属第三医院妇产科，广东 广州510630) [摘 要] 目的：评价富集母血浆中胎儿游离 DNA的实验平台在母血浆中富集、鉴定胎儿游离 DNA的适用范 围。方法：(1)筛选与父源性 13地中海贫血基因连锁的单核苷酸多态性(SNP)位点：利用 Haploview软件对20例31 地中海贫血患者(其中CD41_42型11例 ，IVS-11-654型9例)的31地中海贫血基因(HBB基因)进行SNP与单倍型自 动化分析，检索出HBB基因内杂合度较高的SNP位点并检测与 CD41_42位点及IVS一11-654位点连锁的SNP位点。 (2)选取4例孕妇外周血标本，且夫妇双方为不同的31地中海贫血基因类型，利用快速耐受温度-低变性温度共扩增 PCR技术 (tit．FAST．COLD．PCR)检测父源性 B地中海贫血基因类型为 IVS一11-654型的孕妇外周血标本，若未直接检 测到IVS．I1-654位点，则检测仅与IVS．11-654位点连锁的SNP位点；同样的原理，利用完全耐受温度一低变性温度共扩 增技术 (Tr．FULL．COLD．PCR)检测父源性B地中海贫血基 因类型为 CD41-42型的孕妇外周血标本；同时利用普通 PCR技术对上述标本进行检测。结果：(1)检测 出IVS-II654位点与 rs7480526位点连锁9例；CD41-42位点与 点连锁 11例；(2)通过 1-r-FAST—COLD—PCR技术在孕妇外周血 中检测出 1例父源性致病突变基因 (IVS．11-654位点)，另外 1例未直接检测到父源性致病突变基因，但检测到与其连锁的SNP位点(m7480526位点)， 与羊水细胞培养检测结果一致 ，检出率为 100％(2／2)；通过TF-FULL—COLD-PCR技术在孕妇外周血中检测出2例父 源性致病突变基因(CD41_42位点)，与羊水细胞培养检测结果一致，检出率为 100％(2／2)；而普通PCR技术均未检 测到上述父源性致病突变基因及与父源性等位基因连锁的SNP位点。结论：Tr-COLD-PCR技术适用于富集母血浆 中胎儿游离 DNA突变，可用于无创性产前诊断单基因遗传病。 [关键词] 无创性产前诊断；胎儿游离 DNA；耐受温度．低变性温度共扩增技术；B地中海贫血；单核苷酸多态 性 [中图分类号] R714．55 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．10．023 Noninvasiveprenataldiagnosis0f thalassemiabyenrichingcell-freefetal DNA inmateralplasma WANGQing-qing，ZHANGYuan，ZHANGJun，HAOXiu—lan，HOUHong-ying (DepartmentofObstetricsandGynecology，theThirdAffiliatedHospitalofSunrat—senUnivemi~，Guangzhou510630，Chi- ， ．E·mail：gdgzhhyy@ 163．com [ABSTRACT] AIM：Toestablishakindofsimpleandefficientmethodforcell-freefetalDNA (cff-DNA)enrich— mentandtoinvestigateitsrangeofapplicationsandtheadvantagesnaddisadvantages．METHODS：(1)Thesinglenucleo- tidepolymorphisms(SNPs)，whichlinkedtopatern