人肝再生增强因子FAD辅助的巯基氧化酶活性测定及其活性位点研究.pdfVIP

维普资讯 生国痘理生理杂志 hineseJournalofPathophysiology 2006，22(11)：2247—2250 · 2247 · [文章编号] 1000—4718(2006)11—2247—04 人肝再生增强因子 FAD辅助的巯基氧化酶活性 测定及其活性位点研究木 潘 艳 ， 鞠桂芝 ， 佟明华 ， 李茹冰 ， 杨联萍。， 李修义 ， 孔祥平 (解放军458医院全军肝病中心，广东 F-#I510600；。吉林大学公共卫生学院， 卫生部放射生物学重点实验室，吉林 长春 130021) [摘 要] 目的：建立一种灵敏、简便 、有效的判断人肝再生增强因子蛋白(ALRp)巯基氧化酶活性的方法，并 分析ALRp的CXXC活性结构域在其发挥酶活性中的作用。方法：通过定点突变将ALRp的CXXC结构中的一个半 胱氨酸突变为丙氨酸。巯基氧化酶实验分4组：①ALR组；@ALR—FAD组 ；@ALR突变体 一FAD组；④无蛋白对照 组。以还原型谷胱甘肽 (GSH)为底物，于不同时点测定每组巯基浓度。结果：ALR—FAD组巯基浓度随时问的推移 不断下降；其它3组巯基浓度在整个实验中均无明显变化。结论：建立了一种半定量分析ALRp巯基氧化酶活性的 方法；并证明ALRp必须在 FAD辅助下发挥酶活性，且 ALRp的CXXC结构是ALRp具有该酶活性必不可少的部分。 [关键词] 肝再生增强因子；突变；巯基氧化酶 [中图分类号] Q503 [文献标识码] A FAD -—dependentsulfhydryloxidaseactivityofaugmenterofliverregener． ationproteinand itsactivitymotif PAN Yan ’，JU Gui—zhi，TONGMing—hua ，LIRu—bing，YANG Lian—ping ，LI Xiu—vi．KONG Xiang—ping (CenterofInfectionsDisease，The458thHospitalofPLA，Guangzhou510600，China．E—mail：xiangpingkong@hotmail． corn；MHRadoiboilogyResearchUnit，SchoolofPublwHealth，JilinUniversity，Changchun130021，China) [ABSTRACT] AIM：Toestablishasensitiveandeffectivemethodtodeterminewhetheraugmenterofliverregenera— tionprotein (ALRp)hastheactivityofsulfhydryloxidase．METHODS：Thecysteineatthepositionof65inCXXCmotif containedinALRpwaschangedintoalaninethroughsite—directedmutation．Therewerefourgroupsintheexperiment：① ALRgroup；② ALR—FADgroup；③MutatedALR—FADgroup；④ Controlrgoup．UsingGSHassubstrate，atdifferent timepoints，theconcentration ofthiolineachgroupWas measured．RESULTS：Theconcentration ofthiolgroupsinthe ALR—FAD groupwasdecreasedduringthetimeoftheexperiment．Butthethiolintheothergroupsdidn’tshowanysignifi— cantdecrease．CONCLUSION