人肺组织体外感染模型的建立及NTHi诱导炎症反应的机制研究.pdfVIP

· 1472· 堡生理 圭 se』9umalofPathophysiology 2011，27(8)：1472—1475 [文章编号] 1000—4718(2011)08—1472—04 人肺组织体外感染模型的建立及 NTHi诱导炎症反应的机制研究水 刁 然 ， 夏靖燕 ， 徐 峰 ， 程玉生。， 杨 燕 ， 王选锭 (浙江大学医学院附属二院 呼吸科，肿瘤放疗科 感染管理科 ，浙江 杭州310009) [摘 要] 目的：研究不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)诱导肺组织炎症反应的关键信号通路。方法：肺组织 与NTHi(10 CFU／L)共孵育4h和24h。Westernblotting检测肺组织的磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶 (p38 MAPK)，电泳迁移率法检测核因子 KB(NF—KB)核转位，实时定量RT—PCR检测Toll样受体 (TLR)2mRNA，酶联 免疫吸附试验检测上清的白细胞介素(IL)一8水平。另外，肺组织预先与抗TLR2单抗 (anti—TLR2：5m#L)、p38 MAPK抑制剂(SB203580：20~mol／L)或 NF—KB抑制剂(PDTC：25I．LmoVL)孵育2h，再加入NTHi(10 CFU／L) 刺激24h，收集组织上清，测定 IL一8。结果：肺组织感染NTHi4h后 ，肺组织TLR2一p38MAPK—NF—KB信号通 路迅速被激活。感染24h后，肺组织 IL一8表达较未感染组显著增加 (P0．05)。抗 TLR2单抗、特异性 p38 MAPK和NF—KB分子阻断剂可以明显抑制NTHi诱导的IL一8表达。结论：NTHi通过TLR2一p38MAPK—NF一 ．cB信号通路诱导肺组织分泌炎症因子。人体外肺组织感染模型为研究病原体和宿主相互作用提供了新的平台。 [关键词] 不可分型流感嗜血菌；炎症反应；模型，肺感染 [中图分类号】 R363 [文献标识码】 A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．08．004 Establishmentofhumanlunginfeetionmodel／nvitroandmechanisms0f NTHi—induced inflammatoryresponses DIAORan ，XIAJing—yan ，XU Feng，CHENG Yu—sheng ，YANG Yan ，WANG Xuan—ding (DepartmentofRespiratoryMedicine，DepartmentofRadiotherapy，DepartmentofInfectionPreventoinandControl，The SecondAffiliatedHospital，ZhejiangUniversitySchoolofMedciine，Hangzhou310009，China．E—mail：xufen#9@yahoo． com) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatethekeysignalpathwaysofinflammatoryresponsesinlungtissuesinducedby theinfectionofnontypeableHaemophilusinfluenzae(NTHi)．METHODS：Humanlungtissueswereco—incubatedwith NTHi(10 CFU／L)for4hand24h，respectively．Thephosphorylationofp38mitogen—activatedproteinkinase (MAPK)wasdetectedbyWesternblotting．Thenucleartranslocationofnuclearfactor(NF)一zBwasexaminedbyelec— trophoreticmobilityshiftassay(EMSA)．TheexpressionofToll—likereceptor(TLR)2wasmeasuredbyreal—time quan