慢病毒介导的c-met+RNA干扰对人乳头状甲状腺癌K1细胞生物学行为的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(10)：1819—1824 · 1819 · [文章编号] 1000—4718(2012)10—1819—06 慢病毒介导的C—metRNA干扰对 人乳头状 甲状腺癌 K1细胞生物学行为的影响 郑时玉， 王 丽， 刘泽兵， 桂 律 (复旦大学附属金山医院病理科，上海 201508) [摘 要】 目的：探讨 e—Met在乳头状 甲状腺癌 (PTC)中的表达；构建针对人 C—met基因的RNA干扰 (RNAi)慢病毒载体，并观察其对K1细胞c—met基因的沉默效应及对细胞生物学行为的影响。方法：免疫组化方 法检测35例乳头状甲状腺癌及25例良性甲状腺疾病手术切除标本中c—Met的表达；构建人c—met基因的RNAi 慢病毒载体，应用荧光定量RT—PCR与Westernblotting检测其对c—met的干扰效率，应用克隆形成实验、流式细 胞术、划痕实验和Transwell实验检测其对细胞克隆形成、周期、迁移、侵袭能力的影响，应用裸鼠模型评估 RNA干 扰后细胞成瘤能力的影响。结果 ：C—Met在PTC中的表达明显高于良性甲状腺组织；成功构建了c—metRNAi慢 病毒载体，RT—PCR及Westernblotting实验显示其对乳头状甲状腺癌K1细胞 C—metmRNA及蛋白表达的抑制均 较明显；克隆形成实验显示c—metRNAi慢病毒载体能够抑制K1细胞的克隆形成能力；流式细胞术检测显示c— metRNAi慢病毒载体能够减少s细胞比列；划痕实验及Transwell实验显示 c—metRNAi慢病毒载体能够抑制细胞 迁移和侵袭；裸鼠成瘤实验显示RNA干扰后细胞的成瘤能力降低。结论：C—metRNAi慢病毒载体能够抑制 Kl 细胞的克隆形成能力、细胞周期进程、迁移、侵袭及成瘤能力。 [关键词] 甲状腺肿瘤；原癌基因，C—met；慢病毒载体；RNA干扰 [中图分类号] R736．1 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．10．016 Effectsoflentivirus—-mediatedC-—metRNAion biologicalbehaviorsof humanpapillarythyroidcancerK1cells ZHENG Shi—yu．WANG Li。LIU Ze—bing。GUILn (DepartmentofPathology，JinshanHosp~al，FudanUniversity，Shanghai201508，China．E—mail：jsyyblkgl@163．com) [ABSTRACT] AIM：ToevaluatetheexpressionofC—Metinpapillarythyroidcancer(PTC)byconstructing lentiviralvectorsforRNAinterference(RNAi)ofC—metgeneanddetectingitssilencingeffectonthebiologicalbehaviors ofhumanpapillarythyroidcancercelllineK1cells．METHODS：Immunohistochemical assayWas performedtodetectthe expressionofC—Metprotein in35 casesofPTC and25 casesofbenignhtyroid disease．LentiviralvectorofrRNA of C—metgeneWas constructedandthesilencingeffectWas detectedbyRT—PCRandWestern blotting．Thecolony—fomr ing ability，cellcycle，migrationandinvasionofKIcellsweremeasuredbycolony—fomr ingassay