人端粒酶hTERT可诱导RNAi系统的建立及其对TREx—HeLa细胞生长的影响.pdfVIP

维普资讯 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(3)：537—542 · 537 · 【文章编号】 1000-4718{2008)03—0537—06 人端粒酶 hTERT可诱导 RNAi系统的建立及其 对 TREx—HeLa细胞生长的影响，lc 柏 芸， 杜贻鹏， 骆晓枫， 米 洋， 袁广卿， 何 霞， 陈展辉， 周俊宜 (中山大学中山医学院生化教研室 ，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：建立可诱导性沉默hTERT的RNA干扰系统，并初步探讨端粒酶与细胞增殖调控之间的关 系。方法 ：构建沉默端粒酶催化亚基 hTERT的Tet—on可诱导性 RNAi载体 psiRNA—hH1／TO—hTERTshRNA，并 稳定转染表达TR的TREx—HeLa细胞，用半定量RT—PCR检测 hTERT的转录后水平，TRAP法检测端粒酶活性。 MTY法检测细胞的增殖，流式细胞仪和Hoechst33342染色法观察细胞凋亡。结果：构建了可诱导性沉默端粒酶催 化亚基hTERT的重组体psiRNA—hH1／TO—hTERTshRNA，并建立了可诱导性沉默hTERT的TREx—HeLa细胞株。 短期内的端粒酶活性降低后TREx—HeLa细胞生长增殖有下降趋势，而其凋亡情况则未见明显变化。结论 ：本研 究建立了可诱导沉默hTERT的RNAi系统，为研究端粒酶活性与细胞增殖和衰老的关系提供了实验基础。 [关键词】 RNA干扰；四环素可诱导RNAi系统；端粒，末端转移酶；细胞凋亡；TREx—HeLa细胞 [中图分类号] 11363 [文献标识码] A Constructtetracycline——inducible H1 RNAisystem ofhTERT and its functioninTREX—HeLacellline BOYun，DU Yi—peng，LUO Xiao—feng，MIYang，YUAN Guang—qing，HE Xia， CHEN Zhan—hui。ZHOU Jun—vi (DepartmentofBiochemistry，ZhongshanMedicalCollege，SunYat—sertUniversity，Guangzhou510080，China．E—mail： 伽 126．com) [ABSTRACT] AIM：Toconstructatetracycline—inducibleH1RNAisystemofhTERTandtostudytheapoptosis ratesandsurvivalratesoftertacycline—induciblehTERT RNAicellline．M ETHODS：Thetetracycline—inducibleH1 RNAisystemforhTERTwasconstructedna drtansfcetedintoTREx—HeLacellline．Theinhibitoryeffectsweredetermined byRT—PCR andTAR P．TheproliferationofthecelllineintwogroupswasassayedbyM1rrtest．Th eapoptoticrateswere estimatedbyusingHocehst33342andFACS．RESULTS：Tetracycline—inducibleH1RNAisystem ofhTERTWas con- structedsuccessfullyna dTREx——HeLacellinduciblelyinterferedwithhTERTWas culturedsuccessfully．Astohtedifferent celllines，differentinfluencesaftertelomeraseactivityweredeclined．ForTREx—He