天花粉蛋白诱导黑色素瘤凋亡机制的研究.pdfVIP

维普资讯 · 2258· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(11)：2258—2261 [文章编号] 1000—4718(2007)11—2258—04 天花粉蛋 白诱导黑色素瘤凋亡机制的研究 周欣 阳， 张天一， 顾君一 ， 丁 斐 (南通大学神经再生重点实验室，江苏 南通226001) [摘 要] 目的：研究天花粉蛋白(TCS)对黑色素瘤B一16细胞的作用 ，探讨天花粉蛋 白抗肿瘤的机制。方 法：(1)应用单细胞电泳及 Hoechsd3258染核形态观察来研究TCS对黑色素瘤B一16细胞损伤作用。(2)应用激 光共聚焦扫描显微术结合特异性荧光探针Fluo一3／AM、H2DCF—DA和DAF—FMdiacetate观察在TCS作用下，单 个瘤细胞内钙离子(ca )、一氧化氮 (NO)和活性氧(ROS)的信号动态变化 ，并探讨细胞内ROS和NO的增加与钙 离子的关系。结果：(1)终浓度50mg／LTCS孵育3h、6h后，单细胞电泳 、Hoechst33258染色的核形态观察未发现 与对照组有明显区别 ；孵育 12h后单细胞电泳可见DNA损伤的特征性现象一彗星尾巴；Hoechst33258染色的核形 态观察发现有明显的核浓缩和边集现象，出现特征性凋亡小体。(2)终浓度 50mg／L的TCS可引起细胞内Ca“、 NO和ROS的生成量明显高于对照组(P0．O1)。细胞内ROS和NO的增加与钙离子的增加密切相关。结论：天 花粉蛋白对黑色素瘤B一16细胞DNA具有较强损伤作用，可诱导其发生凋亡；天花粉蛋白诱导凋亡可能与细胞内 钙、ROS和NO的增加有关。 [关键词] 天花粉素；黑色素瘤；B一16细胞；钙；活性氧；一氧化氮 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Trichosanthin—inducedapoptosisinmelanomaB 一16cellline ZHOUXin—yang，ZHANGTian—yi，GUJun—yi，DINGfei (KeyLaboratoryofNeuroregeneration，NaatongUniversity，Nantong226001，China．E—mail：prozxy@atu．edu．cn) 『ABSTRACT] AIM ：Toinvestigatetheantitumoreffectandmechnaismoftrichosnathin(TCS)onmelnaomaB一 16cells．METHODS：(1)TheinjuryofB一16cellsbytrichosanthinwasobservedwithSCGEnadhoechst33258staining mehtod．(2)LCSMandspecificityfluorescentprobeFluo一3／AM，H2DCF—DA，DAF—FMdiacetatewereappliedtoan— alyzethedynamicchnagesofCa“． ROSandNOinsin~ecellculturedwithTCS．Simultaneously，therelationshipbe— tweenROS．NOatadincreaseofCa“Wasalsorevealed．RESULTS：(1)WhentreatedwithTCS(50mg／L)for3hnad 6h，neithercytotoxicityassaynorSCGEshowedthedifferencescompraedwithcontrolgroup．After12hincubation，spe ci— ficityphenomenaofDNAinjury—comettailappearedinSCGEandchromatincondensationevenapoptoticbodyformation wereseenbyHoechst33258